[发明专利]改进向细菌细胞中导入DNA的方法有效
| 申请号： | 200780050643.5 | 申请日： | 2007-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN101595214A | 公开（公告）日： | 2009-12-02 |
| 发明（设计）人： | 迈克尔·托马斯;迈克尔·雷伊 | 申请（专利权）人： | 诺维信股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 | 代理人： | 史 悦 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 改进 细菌 细胞 导入 dna 方法 | ||
1.一种分离的DNA甲基转移酶，其为SEQ ID NO：4的氨基酸1至337。
2.权利要求1的DNA甲基转移酶，其由SEQ ID NO：3的核苷酸1至 1011的多核苷酸编码。
3.编码权利要求1或2的DNA甲基转移酶的分离的多核苷酸。
4.包含权利要求3的多核苷酸的核酸构建体或重组表达载体，所述多核 苷酸与在表达宿主中指导多肽产生的一个或多个调控序列可操作连接。
5.包含权利要求3的多核苷酸的重组宿主细胞。
6.产生DNA甲基转移酶的方法，其包括：(a)在有益于产生DNA甲基 转移酶的条件下培养权利要求5的重组宿主细胞；和(b)回收所述的DNA甲 基转移酶。
7.产生细菌转化体的方法，其包括：
(a)将DNA导入第一细菌宿主细胞，所述细胞包含权利要求3的编码 DNA甲基转移酶的多核苷酸，以产生甲基化的DNA；
其中所述DNA甲基转移酶为SEQ ID NO：4的氨基酸1至337的DNA甲 基转移酶；和
(b)将来自第一细菌宿主细胞的甲基化DNA转移入第二细菌宿主细胞， 其中所述第二细菌宿主细胞包含能降解DNA但不能降解甲基化DNA的限制 性内切核酸酶；和
(c)分离包含甲基化DNA的第二细菌宿主细胞的转化体。
8.通过权利要求7的方法获得的转化体。
9.产生细菌转化体的方法，其包括：
(a)用权利要求1或2的DNA甲基转移酶将DNA体外甲基化，以产生 甲基化DNA；
其中所述DNA甲基转移酶为SEQ ID NO：4的氨基酸1至337的DNA甲 基转移酶；
(b)将甲基化DNA导入细菌宿主细胞，其中细菌宿主细胞包含能降解 DNA但不能降解甲基化DNA的限制性内切核酸酶；和
(c)分离包含甲基化DNA的细菌宿主细胞的转化体。
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