[发明专利]用于富集、除去和检测革兰氏阳性细菌的方法和手段

权利要求书

1.由下述组成的多肽：

i)内溶素或另一种细胞壁溶解酶的无酶促活性的细胞壁结合结构域，其中所述无酶促活性的细胞壁结合结构域选自：SEQ ID NO：19、21、23-33，和

ii)JS标签，其选自SEQ ID NO：1-18，其中所述JS标签位于i)中所述的序列的C-或N-末端，并且任选地

iii)接头，其选自由SEQ ID NO：34-38组成的组的序列，其中接头位于i)中所述的序列和ii)所描述的序列之间，和/或

iv)间隔区序列，其选自GFP、GST或MBP组成的组，其中所述间隔区位于i)中所述的序列和ii)所描述的序列之间，

其中除i)中所述细胞壁结合结构域之外，所述多肽不包含内溶素或另一种细胞壁溶解酶的别的结构域，并且其中多肽能够结合革兰氏阳性细菌，但在SEQ ID NO：19的情况中多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)和球形芽孢杆菌(B.sphaericus)除外，和通过蛋白生物素连接酶而被体内生物素化。

2.根据权利要求1的多肽，其中所述多肽是生物素化的。

3.根据上述权利要求任一项的多肽，其显示由下组序列组成的序列：

i)选自SEQ ID NO：8的序列，

ii)选自SEQ ID NO：19的序列，

iii)选自SEQ ID NO：35的序列，和任选地

iv)作为间隔区的GFP、GST或MBP序列。

4.根据权利要求3的多肽，其为所示SEQ ID NO：42-43的序列之一。

5.编码根据权利要求1至4任一项的多肽的核酸。

6.根据权利要求5的核酸，其中编码SEQ ID NO：1-18的序列的N端序列以选自SEQ ID NO：54-56的序列开始。

7.编码根据权利要求1至4中任一项的多肽的载体。

8.表达根据权利要求5或6的核酸或依照权利要求7的载体的细胞。

9.根据权利要求1至4任一项的多肽之一用于结合、富集、从样品中除去、捕获和/或检测细菌的用途，其中所述用途不是疾病的诊断或治疗方法。

10.用于富集、除去、捕获和/或检测来自样品的细菌的方法，其中所述方 法不是疾病的诊断或治疗方法，其包括以下步骤：

a)使样品与生物素化的依照权利要求1至4任一项的多肽接触和/或一起温育，

b)使步骤a)中获得的所述多肽-细菌复合物与提供生物素结合物质的载体接触和/或一起温育，

c)将步骤b)中获得的所述载体-多肽-细菌复合物与所述样品分开，

d)任选地，自所述载体-多肽-细菌复合物清洗非特异性附着的样品成分，

e)任选地，将所述载体与所述多肽-细菌-复合物分开，并

f)任选地，检测所述细菌。

11.根据权利要求10的方法，其中所述生物素结合物质包含亲合素或链霉抗生物素蛋白。

12.根据权利要求11的方法，其中所述方法经由磁性、层析或分批方法来实施。

13.根据权利要求10至12任一项的方法，其中步骤f)中的所述检测经由选择性生长条件、基于核酸的方法；细菌细胞壁及其成分的检测，细菌成分的检测经由偶联有标志物的别的特异性细胞壁结合结构域，和/或经由微生物学、形态学和/或生化检测方法的组合来实施。

14.根据权利要求13的方法，其中所述基于核酸的方法选自下组：PCR、RT-PCR、PCR-RFLP、rep-PCR指纹法、NASBA、DNA杂交方法、多基因座序列分型(MLST)和rRNA比较。

15.根据权利要求13的方法，其中所述细菌细胞壁及其成分的检测分别经由内溶素、抗体的细胞结合结构域或经由FTIR来实施。

16.根据权利要求13的方法，其中所述细菌成分的检测经由ELISA、酶活性、多位点酶电泳(MEE)或生物发光测定法来实施。