[发明专利]多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物

权利要求书

1.制备包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌(Streptococcus  pneumoniae)血清型3多糖的免疫原性缀合物的方法，所述方法包括

(a)使纯化的血清型3多糖与选自乙酸、柠檬酸或碳酸的温和的酸反 应，得到水解的血清型3多糖；

(b)在二价阳离子的存在下使水解的血清型3多糖与氧化剂反应，得 到活化的血清型3多糖，其中所述的氧化剂是高碘酸且二价阳离子是Mg²⁺或Ca²⁺；

(c)使活化的血清型3多糖与载体蛋白混合；

(d)使混合且活化的血清型3多糖和载体蛋白与还原剂反应，得到血 清型3多糖：载体蛋白缀合物；和

(e)封闭血清型3多糖：载体蛋白缀合物中未反应的醛，得到包含与载 体蛋白共价连接的肺炎链球菌血清型3多糖的免疫原性缀合物；

其中所述载体蛋白选自：白喉类毒素；破伤风类毒素、百日咳类毒素、 霍乱类毒素、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas  aeruginosa)的外毒素A；外膜复合体c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合 蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌黏附素蛋 白(PsaA)、来自A组或者B组链球菌的C5a肽酶、流感嗜血杆菌蛋白D； 卵白蛋白；匙孔血蓝蛋白(KLH)；牛血清白蛋白(BSA)或者结核菌素 的纯化的蛋白质衍生物(PPD)。

2.权利要求1的方法，还包括在与载体蛋白混合前纯化活化的血清型 3多糖。

3.权利要求1或2的方法，还包括在与还原剂反应前，共同冻干所述 混合且活化的血清型3多糖和载体蛋白。

4.权利要求1或2的方法，还包括纯化免疫原性缀合物。

5.权利要求1或2的方法，其中所述的温和的酸是乙酸。

6.权利要求1或2的方法，其中所述的载体蛋白是CRM₁₉₇。

7.权利要求1或2的方法，其中所述的还原剂是氰基硼氢化钠。

8.权利要求1或2的方法，其中封闭未反应的醛包括使血清型3多糖： 载体蛋白缀合物与硼氢化钠反应。

9.制备包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌血清型3多糖的免疫原 性缀合物的方法，所述方法包括：

(a)使纯化的血清型3多糖与乙酸反应，得到水解的血清型3多糖；

(b)在MgCl₂的存在下使水解的血清型3多糖与高碘酸反应，得到活 化的血清型3多糖；

(c)纯化活化的血清型3多糖；

(d)使活化的血清型3多糖与载体蛋白混合；

(e)共同冻干混合且活化的血清型3多糖和载体蛋白；

(f)使共同冻干且活化的血清型3多糖和载体蛋白与氰基硼氢化钠反 应，得到血清型3多糖：载体蛋白缀合物；和

(g)用硼氢化钠封闭血清型3多糖：载体蛋白缀合物中未反应的醛，得 到包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌血清型3多糖的免疫原性缀合 物；

其中所述载体蛋白选自：白喉类毒素；破伤风类毒素、百日咳类毒素、 霍乱类毒素、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas  aeruginosa)的外毒素A；外膜复合体c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合 蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌黏附素蛋 白(PsaA)、来自A组或者B组链球菌的C5a肽酶、流感嗜血杆菌蛋白D； 卵白蛋白；匙孔血蓝蛋白(KLH)；牛血清白蛋白(BSA)或者结核菌素 的纯化的蛋白质衍生物(PPD)。

10.权利要求9的方法，还包括纯化所述免疫原性缀合物。

11.权利要求9或10的方法，其中所述的载体蛋白是CRM₁₉₇。