[发明专利]用于产生脱唾液酸化免疫球蛋白的方法和载体

权利要求书

1.一种用于在包含工程改造为表达含Fc分子的哺乳动物细胞的培养物中提供唾液酸酶酶促活性的方法，其包括用编码产脲节杆菌唾液酸酶A的催化结构域的载体转染所述哺乳动物工程改造的细胞，其中所述多肽连同所述含Fc分子一起分泌到所述培养物内，由此所述多肽唾液酸酶酶促活性可以作用于所述含Fc分子聚糖。

2.权利要求1的方法，其中所述含Fc分子是抗体，并且哺乳动物细胞系选自COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、YB2/0或Y3、骨髓瘤或淋巴瘤细胞、或其任何衍生、无限增殖化或转化细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述抗体是抗-TNFα抗体，并且所述细胞系是C168M。

4.一种包含编码产脲节杆菌唾液酸酶A的核苷酸序列的表达载体，其中所述载体能够在表达含Fc分子的哺乳动物细胞培养物中表达具有唾液酸酶酶促活性的多肽。

5.权利要求4的载体，其中所述哺乳动物细胞系选自COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、YB2/0或Y3、骨髓瘤或淋巴瘤细胞、或其任何衍生、无限增殖化或转化细胞。

6.权利要求4的载体，其中所述载体包含信号序列、启动子序列和抗生素抗性。

7.权利要求6的载体，其中所述信号序列是人生长激素信号序列，所述启动子序列是CMV启动子序列，和所述抗生素抗性是新霉素。

8.一种用于控制细胞系中表达的含Fc分子性质的方法，其包括通过用编码产脲节杆菌唾液酸酶A的催化结构域的载体转染所述细胞系来减少所述Fc区中寡糖的唾液酸化，其中所表达的所述含Fc分子包含减少量的唾液酸残基。

9.权利要求8的方法，其中控制的所述含Fc分子的性质是所述分子对于多重定位的靶蛋白质的抗体亲抗原性；对于一种或多种Fcγ受体FcγRI、FcγRIIA和FcγRIIIA的亲和力；ADCC活性；巨噬细胞或单核细胞活化；和血清半衰期。

10.权利要求8的方法，其中所述含Fc分子是抗体，并且所述哺乳动物细胞系选自COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、YB2/0或Y3、骨髓瘤或淋巴瘤细胞、或其任何衍生、无限增殖化或转化细胞。

11.权利要求10的方法，其中所述抗体是抗-TNFα抗体，并且所述细胞系是C168M。

12.权利要求8的方法，其中所述含Fc分子具有对于靶特异的结合结构域，所述靶是固定的靶。

13.权利要求8的方法，其中所述含Fc分子具有对于靶特异的结合结构域，所述靶在细胞表面上表达。