[发明专利]鼠妇镇痛肽的制备

权利要求书

1、制备工艺包括以下步骤为：

总蛋白的提取

取一定量鼠妇用，用预冷的洗涤缓冲溶液洗去除杂质和其他组织，经过压榨 搅拌后，加入配置好的适量裂解液，混匀，在冰面上用超声粉碎；冰冻离心， 一定时间，取上清进行超率(截流率值大于等于5000)为待处理蛋白提取物， 冻存于冰箱中；

蛋白质粗制品的获得

方法1、不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将 目的蛋白沉淀分级析出；被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再 度溶解而不变性；收集不同条件下沉淀出来的蛋白质组分；之后进行盐析、浓 缩；选择具有镇痛作用的组分待用；

方法2、用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶 解度分级降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下 进行；收集不同条件下沉淀出来的蛋白质组分。之后进行复性、浓缩；镇痛作 用的组分待用；

样品的进一步分离纯化

选择具有镇痛作用的组分，分别利用进行凝胶层析，用层析缓冲液洗脱，收 集具有镇痛功能的多肽；可以收集到1500～2000Da，3000～5000Da；两组具有 镇痛作用的多肽。

2、根据权利要求1所述的本工艺所采用的适量的缓冲溶液，包括洗涤缓冲 液和层析缓冲液，是指缓冲范围包括pH值5～7的一切缓冲溶液。

3、根据权利要求1所述的本盐析工艺所采用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸 镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等，分段盐析具体方法不限。

4、根据权利要求1所述的有机溶剂，主要为可以与水混溶的溶剂，包括但 不限于甲醇，乙醇或丙酮。

5、根据权利要求1所述的浓缩工艺，其特征在于使样品浓度提高，而不使 样品活性受损，包括但不限于真空低温冻干、旋转蒸发、真空干燥等手段。

6、根据权利要求1所述的层析工艺，其特征在于使样品得到分离提纯，包 括但不限于以下葡聚糖凝胶层析、离子交换层析、聚乙烯醇层析、聚乙烯酰胺 层析、琼脂层析、琼脂糖层析、浮石层析等手段；常用方法为葡聚糖凝胶层析 和离子交换层析。

7、根据权利要求5所述的旋转蒸发工艺，其特征在于使样品浓度提高，而 不使样品活性受损，蒸发温度低于100℃，旋转速度范围为0～100000转/分钟。

8、根据权利要求5所述的低温冻干工艺，其特征在于使样品浓度提高，而 不使样品活性受损，蒸发温度包括-500℃～50℃，冻干时间包括0～15天。

9、根据权利要求6所述的葡聚糖凝胶层析层析工艺，其特征在于使样品得 到分离提纯，所用凝胶为G-75、G-25。