[发明专利]一种分子辅助的枣树人工控制杂交育种方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子辅助的枣树人工控制杂交育种方法。

背景技术

杂交育种可使父本与母本的基因重新组合实现种质创新，是果树育种中最为常用的方法之一。但在枣树上，由于花小(直径仅0.5cm左右)、人工去雄困难，加之枣树自然坐果率很低且胚败育严重，导致人工杂交后很难获得杂种后代。国内外多家科研单位先后进行了大量的枣树人工授粉实践(人工去雄、人工授粉、套袋)，但很少获得杂种后代群体，迄今国内外在枣树上尚未通过人工杂交培育出新品种。目前，枣树的种质创新工作主要是通过自然实生选种和诱变育种等，育种的定向性较差，育种效率较低。因此，开发可大量获得杂种后代的高效枣树杂交育种技术成为当务之急。

枣花为典型的虫媒花。枣的花粉粒粘性大，靠风力不能进行传粉，自然条件下主要通过蜜蜂等传粉昆虫进行传粉。如果对相邻的父本和母本进行罩网处理，并在网内放蜂，可望在有效阻止外来花粉传入的情况下，实现人工可控的杂交授粉，进而借助分子标记技术对杂交后代进行早期鉴定以确定杂种。

发明内容

本发明建立了一种分子辅助的枣树人工控制杂交育种方法，有利于通过人工选配父、母本组合而高效率地获得杂种后代，加快枣树杂交育种进程。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：首先选择理想的杂交亲本，将两个亲本(父本和母本)相邻栽植或者嫁接在同一株枣树上，在花期用网把双亲罩起来实现与其它枣树隔离，网内放传粉昆虫(蜜蜂等)促进传粉，花期结束后撤掉传粉昆虫和网，及时采收亲本树上的果实，剥取种仁，适时播种，利用分子标记技术进行杂种鉴定，保留杂种植株，进一步评价。

本发明的具体内容，即分子辅助的枣树人工控制杂交育种的方法如下：

(1)按照育种目标选择合适的父本和母本，一般选择综合性状优良且含仁率高、种仁饱满的品种或优系作母本，以与母本具有互补优良性状且花粉量大、花粉活力高、授粉亲和力强的品种或优系作父本，将两个亲本(可以互为父本和母本)相邻栽植或者嫁接在同一株枣树上；

(2)在两个亲本植株即将进入花期之前，将其用通风透光但可阻止传粉昆虫进入的网全部罩住，在网内放入没有采集过枣花粉的传粉昆虫(如蜜蜂等)帮助传粉杂交，同时在网内放入糖水延长传粉昆虫的传粉时间，盛花期结束后撤掉传粉昆虫，花期结束后撤掉网罩；

(3)两个亲本上所结果实成熟后，分别全部取下，取出完整种仁；

(4)将种仁分别播种获得实生苗，实生苗分单株提取基因组DNA，同时提取两个亲本的基因组DNA，采用AFLP或RAPD等分子标记技术，确定各株实生苗是否为杂种实生苗；

(5)对杂种实生苗进行系统观察比较和评价，选育优良品种。

本发明专利的有益效果是，通过罩网将两个杂交亲本与其他枣树隔离，借助传粉昆虫辅助传粉，最后利用分子标记技术对杂交后代进行是否为杂种的科学鉴定，这样可以有效解决枣树杂交育种中由于枣花小、去雄非常困难且容易伤花导致难以得到大量杂种后代的问题。该技术应用于枣树育种实践，可突破枣树杂交育种中去雄难的瓶颈，大大加快枣树种质创新进度、提高杂交育种效率。

附图说明

图1是对两个亲本进行罩网和网内放蜂辅助授粉的情况。

图2是罩网控制杂交后母本上结果的情况。

图3是枣树生理落果后，控制杂交的母本所结果实不同发育阶段含仁的情况。

具体实施方式

为选育优良的无核鲜食枣品种，选择一株成龄冬枣(有核、含仁率高、鲜食品质极上、综合性状优良)为母本，与其相邻的一株无核小枣(种核退化、果实可以全部食用)为父本；5月中旬，在母本和父本树进入开花期之前，将两个亲本用白色尼龙网(25孔/cm²)全部罩住；进入花期后在网内放入1箱没有采集过其它枣品种花粉的蜜蜂，并于网内放入一定量的糖水(白糖∶水＝1∶1)；盛花期结束后撤掉蜜蜂，并于花期结束后撤掉尼龙网罩；于母本果实完全成熟后，采取枣果，取出枣核，小心拨取种仁，播种，获得实生苗156株；取父本、母本及各实生苗的幼嫩叶片，采用AFLP分子标记方法，鉴定出杂种实生苗87株；对确定的杂种后代，已进入了田间评价阶段。