[发明专利]一种链霉菌、用其产生他克莫司的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的链霉菌、通过培养该菌产生他克莫司的方法及其应用。 

背景技术

1983年，环孢霉素A通过了美国FDA的认证。该药是一种能有效抗排斥的、由真菌产生的药物，从而给器官移植和自体免疫疾病的治疗带来了巨大的变革。环孢霉素A通过抑制依靠钙激活的途径从而在激活T细胞的早期阶段发挥抑制作用。环孢霉素A可以有效地提高移植病人的存活率。但是，环孢霉素A由于高剂量的使用而引起不少的副作用，例如：肾毒性、神经毒性、肝毒性、高血压、肠胃痉挛、血钾过多、多毛症、牙龈肿大等。 

作为更有效的、低副作用的免疫抑制剂药物，日本的Fujisawa在美国专利4,894,366中公开了一种新的大环内脂的免疫抑制剂：他克莫司。他克莫司比环孢霉素A的药效高100倍。这种大环内脂化合物由链霉菌属菌Streptomyces tsukubaensis发酵产生。和环孢霉素A的作用机制相似，他克莫司的免疫抑制作用是通过抑制依靠钙激活的途径从而在激活T细胞的早期阶段发挥抑制作用。他克莫司的第一次在人的治疗功效表现在肝脏的移植手术中。现在，他克莫司已被广泛应用，尤其是针对那些对环孢霉素A耐受性低的病人。他克莫司的结构式如下： 

此外，美国专利4,894,366公开了两种他克莫司产生菌种Streptomyces tsukubaensis No.9993和Streptomyces hydroscopicus subsp.yakushimaensis No.7238。美国专利5,116,756和5,194,378公开了另一个属于链霉菌属的他克莫司产生菌种Streptomyces sp.ATCC No.55098。 

目前，寻找能够产生免除或降低环孢霉素A的副作用的免疫抑制剂他克莫司和其相关的自发的类似物的新的微生物的工作仍然正在继续进行中。 

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种新的能产生他克莫司或其相关的自发的类似物的微生物。 

根据本发明的一方面，提供了一种新的链霉菌T300(CGMCC1779)(Streptomyces sp.T300)，其可以应用于产生他克莫司或其类似物，或者应用于产生含有他克莫司的药物组合物。 

根据本发明的另一方面，提供了一种采用链霉菌T300(CGMCC1779)制备他克莫司或其类似物的方法。该方法包括采用链霉菌T300(CGMCC1779)在含有可同化的碳、氮源的营养培养基里，有氧发酵的步骤。 

在一个实施方案中，所述可同化的碳源可以是葡萄糖、淀粉、甘油、木糖、木聚糖、糊精、麦芽糖、海藻糖、肌醇、菊糖、水杨苷，或上述物质的组合。

在一个实施方案中，所述可同化的氮源可以是棉籽饼粉、酵母抽提粉、蛋白胨、谷蛋白、黄豆粉、玉米浆、花生粉、小麦粉、干酵母、尿素氨基酸、硝酸盐，或上述物质的组合。也可以选择其它的无机氮源和有机氮源。 

在一个实施方案中，所述营养培养基可以是营养琼脂培养基、国际链霉菌计划培养基1(ISP1)、国际链霉菌计划培养基2(ISP2)或查氏培养基等，优选营养琼脂培养基。 

在一个实施方案中，尤其是在泡沫严重的时候，在培养基中加入消泡剂，该消泡剂可以是植物油、液体石蜡、脂肪油、矿物油或硅油，或它们的组合。 

在一个实施方案中，所述发酵培养的温度为20℃-40℃，优选25℃-37℃，pH为6.5-7.5之间，优选7左右，培养时间为120-240小时。氧通量为0.5-1.0VVM。 

在一个实施方案中，所述发酵方式包括：固体发酵和液体发酵，优选为深层液体发酵。 

在一个实施方案中，所采用的他克莫司产生菌还可以为链霉菌T300(CGMCC1779)自发的突变株或通过常规的诱变得到突变株。 

链霉菌T300(CGMCC1779)的微生物菌种于2006年8月14日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(现地址：北京朝阳区大屯路)，保藏号为CGMCC1779，并登记入册，证明存活。