[发明专利]4＇-去甲基表鬼臼酸的制备和分离方法

权利要求书

1.一种4′-去甲基表鬼臼酸的制备方法，包括：

在微生物梭状芽孢杆菌(Bacillus fusiformis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、红串红球菌(Rhodococcus erythropolis)、北京棒杆菌(Corynebacterium pekinenese)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredovora)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)或弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)的发酵过程中，将底物4′-去甲基表鬼臼毒素溶液加入到任何一种微生物发酵体系中进行生物转化反应，得到含有4′-去甲基表鬼臼酸的生物转化基质；

其中，所述梭状芽孢杆菌的微生物保藏编号为CICC 20463；铜绿假单胞菌的微生物保藏编号为CCTCC AB93066；红串红球菌的微生物保藏编号为CGMCC 1.2362；北京棒杆菌的微生物保藏编号为CCTCC AB97005；枯草杆菌的微生物保藏编号为CCTCCAB93174；噬夏孢欧文氏菌的微生物保藏编号为CGMCC 1.1215；芽孢杆菌的微生物保藏编号为CCTCC AB95018；弯曲假单胞菌的微生物保藏编号为CCTCC AB93074。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的底物4′-去甲基表鬼臼毒素溶液用无水乙醇配制，其浓度为每毫升无水乙醇含有2.5-20毫克的4′-去甲基表鬼臼毒素。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将4′-去甲基表鬼臼毒素溶液添加到微生物发酵体系中至其终浓度为5-2000微克/毫升。

4.按照权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将4′-去甲基表鬼臼毒素溶液加入到微生物发酵体系中至其终浓度为50微克/毫升。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的生物转化反应按照以下条件进行：生物转化反应温度为20-40摄氏度，生物转化反应时间为3-96小时，转速为50-350转/分钟。

6.按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的生物转化反应按照以下条件进行：生物转化反应温度为37摄氏度，生物转化反应时间为20小时，转速为200转/分钟。

7.由权利要求1-6任何一项方法制备得到的含有4′-去甲基表鬼臼酸的生物转化基质。

8.一种从权利要求7所述的生物转化基质中分离出4′-去甲基表鬼臼酸的方法，包括：

(1)将生物转化基质离心后的上清液用大孔吸附树脂柱D312进行初分离，用乙醇水溶液进行梯度洗脱，分段收集洗脱液；

(2)将所收集的20-50％乙醇洗脱液以凝胶柱层析进行细分离，得到4′-去甲基表鬼臼酸。

9.按照权利要求8所述的方法，其特征在于：所述的凝胶柱为Sephadex LH-20凝胶柱。