[发明专利]作为妊娠相关病症的诊断标志物的循环mRNA

说明书

相关申请

本申请要求在2003年1月17日提交的美国临时申请第60,440,906 号的优先权，本发明引用其全文作为参考。

发明背景

通常采用诸如绒毛膜取样(CVS)或羊膜穿刺术的方法从胎儿中分离 细胞来进行产前诊断。尽管操作非常仔细，但这些常规方法均是侵袭性 的，并对母体和胎儿有一定的风险(Tabor et al.，Lancet 1：1287-1293，1986)。

在发现母体循环中存在一些类型的胎儿细胞(Johansen et al.，Prenat. Diagn.15：921-931，1995)之后，更重要的是在发现母体血浆和血清中能够 检测到循环的无细胞的胎儿DNA(Lo et al.，Lancet 350：485-487，1997)之 后，已经开发了替代这些侵袭性方法的产前筛查方法，例如检测胎儿异 常的方法。已证明，母体血液中的胎儿DNA的含量足够用于遗传学分析， 与分离和富集胎儿细胞的必需步骤相比，并不需要对所述血浆或血清进 行复杂的处理。利用聚合酶链式反应(PCR)为基础的技术，通过检测母体 血液中的胎儿DNA来实现胎儿rhesus D(RhD)基因型的检测(Lo et al.，N. Engl.J.Med.339：1734-1738，1998)、胎儿性别的确定(Lo et al.，Hum. Genet.90：483-488，1993)、以及一些胎儿病症的诊断(Amicucci et al.，Clin. Chem.46：301-302，2000；Saito et al.，Lancet 356：1170，2000；及Chiu et al.， Lancet 360：998-1000，2002)。

此外，也有报道称在先兆子痫(Lo et al.，Clin.Chem.45：184-188，1999 和Zhong et al.，Am.J.Obstet.Gynecol.184：414-419，2001)、胎儿21号染 色体三体性(trisomy)(Lo et al.，Clin.Chem.45：1747-1751，1999和Zhong et al.Prenat.Diagn.20：795-798，2000)和妊娠剧吐症(hyperemesis gravidarum)(Sekizawa et al.，Clin.Chem.47：2164-2165，2001)的母体血浆/ 血清中胎儿DNA含量异常的报道。美国专利第6,258,540号也公开了用 于产前遗传分析的母体血液中胎儿核酸的检测。

在分析胎儿DNA时，检测者通常利用仅出现在男性胎儿中的Y染色 体标志物作为胎儿的特异性标志物。这种方法使此项技术的应用局限于 50％的妊娠妇女，这些妊娠妇女怀有男性胎儿。此外，其它遗传多态性的 利用，也增加了胎儿DNA为基础的分析的复杂性。母体血浆中胎儿RNA 的发现提供了超越这些限制的可能的新方法(Poon et al.，Clin.Chem.46： 1832-1834，2000)。

最近，美国专利申请第09/876,005号公开了以母体血液中胎儿RNA 检测为基础的非侵袭性技术。本发明第一次公开了在母体血液中出现的 某些mRNA种类的含量能够用作诊断、监测或预测诸如先兆子痫、胎儿 染色体非整倍性和早产的妊娠相关病症、以及检测妊娠的标志物，所述 mRNA种类包括编码人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)、人促肾上腺皮 质激素释放激素(hCRH)、人胎盘促乳素(hPL)、KiSS-1转移抑制因子 (KISS1)、组织因子途径抑制剂2(TPFI2)、胎盘特异1(PLAC1)或甘油醛 -3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的mRNA。

发明概述

本发明提供了通过检测母体血液中的一种或多种循环mRNA的含量 来诊断、监测或预测诸如先兆子痫、胎儿染色体非整倍性和早产的妊娠 相关病症的新方法。本发明还提供了基于相同方法学的检测妇女妊娠的 方法。所述的mRNA可以编码诸如人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)、 人胎盘催乳素(hPL)、人促肾上腺皮质激素释放激素(hCRH)、KiSS-1转移 抑制因子(KISS1)、组织因子途径抑制剂2(TPFI2)、胎盘特异1(PLAC1) 或甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的胎儿或母体来源的蛋白。同时也提供 以本发明为基础的用于这些妊娠相关疾病状态/妊娠的诊断/检测试剂盒。