[发明专利]重组人血管内皮抑制素在制药中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及重组人血管内皮抑制素的制药用途，该药物可用于各类实体肿瘤的治疗。

背景技术

人血管内皮抑制素(endostatin)是胶原XVIII羧基端的一段分子量大小为20kDa的酶切产物，具有抑制血管内皮细胞增殖、迁移，和体内血管生成的活性，是目前已知最强的内源性血管形成抑制因子。

重组人血管内皮抑制素是利用DNA重组工程技术，以原核或真核表达载体，将人血管内皮抑制素基因经克隆、表达和纯化得到的有血管生成抑制活性形式的蛋白质。

中国发明专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，发明名称为“生产内皮抑制素的方法”)提供了一种改良的，以更高的产率和更简单的纯化工艺生产重组人内皮抑制素的方法。该发明利用DNA重组工程技术，以大肠杆菌表达系统，以简单的方法和较低的成本大批量生产N末端带有(Met)GlyGlyXaaHisHisHisHisHis附加氨基酸序列的人血管内皮抑制素(其中Xaa代表中性氨基酸或不存在)，不仅保留了endostatin的完全的生物学活性，而且没有产生因加入附加N端序列所致的体内免疫性。上述附加氨基酸序列不仅提高了内皮抑制素结构基因的转录和翻译起始效率，有利于重组蛋白的纯化，而且附加氨基酸序列的结构也增加了重组蛋白的稳定性。

恶性肿瘤是一类严重危害人类生命健康的常见病，目前用于肿瘤治疗的主要手段有手术、放疗、化疗和生物治疗。化疗是一种常规的全身性治疗手段，选择性差，在取得治疗效果的同时常出现不同程度的毒副作用，长期使用易产生耐药性而导致治疗失败。

发明内容

肿瘤的生长明显存在新生血管依赖性，肿瘤血管的发生依赖于血管内皮细胞的激活、增殖、吸附和成熟的过程。本发明基于肿瘤发生和发展的这个机制上考虑，如果能用某些治疗手段特异性地抑制异位病灶新生血管的增殖，使得肿瘤组织得不到生长所必需的大量营养和氧气，最后停止生长或坏死，因此可以开辟一种治疗肿瘤的新的手段。

为了克服肿瘤传统化学疗法毒副反应大、选择性差的缺陷，本发明提供了重组人血管内皮抑制素的一种制药用途，具体是使用重组人血管内皮抑制素制备治疗肿瘤的药物的制药用途，该药物具有特异性强、无毒、无耐药性的优点。

本发明的技术解决方案涉及重组人血管内皮抑制素在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

本文中所述重组人血管内皮抑制素保留了endos tatin的完全的生物学活性，可运用基因工程手段获得，通过将人的血管内皮抑制素基因或将改构的人血管内皮抑制素基因构建到大肠杆菌(E.Coli)或毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中，经过发酵、分离、纯化等手段得到。

本发明中优选的重组人血管内皮抑制素是在人血管内皮抑制素编码氨基酸序列的起始氨基酸Met后依次添加0-4个任意氨基酸和2-8个组氨酸序列。其制备方法同中国发明专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，发明名称为“生产内皮抑制素的方法”)。

上述重组人血管内皮抑制素的起始氨基酸Met可能被切除，原因是在表达宿主中蛋白翻译后加工过程中可能被删除。

本发明优选的重组人血管内皮抑制素的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，该序列和中国发明专利(专利公开号为CN1324818A)公开的SEQ ID

NO：2相同，该序列构成的蛋白质的制备方法和上述公开专利的制备实施例相同。

上述治疗肿瘤的药物的制剂可以是注射液或冻干制剂。所述述药物的活性组分可以是重组人血管内皮抑制素、PEG修饰的重组人血管内皮抑制素或重组人血管内皮抑制素微球。所述PEG的分子量是5000-30000，PEG通过共价键(如：琥珀酰亚氨基或巯基)与重组人血管内皮抑制素相连。所述重组人血管内皮抑制素微球是通过基质材料与重组人血管内皮抑制素混合制备而成，其基质材料可以是聚乳酸羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)，聚乙醇酸(PLA)等。

上述治疗肿瘤的药物中还含有保护剂和PH值调节剂。所述保护剂选自多元醇、糖类、氨基酸、表面活性剂，人血白蛋白、EDTA和NaCl。所述药物的PH值范围是4.0-8.5。