[发明专利]新型胰岛素衍生物及其制备方法

权利要求书

1、新型胰岛素衍生物，其特征是：其化合物通式为C_nH_2n+1NH-X-D，式中n＝14-22，C_nH_2n+1NH为直链饱和脂肪氨基；X为遗传编码的脯氨酸以外的天然氨基酸或者一氨基一羧基的非天然氨基酸；D为脱去B30氨基酸残基的天然猪胰岛素或脱去B30氨基酸残基的人胰岛素。

2、根据权利要求1所述的新型胰岛素衍生物，其特征是：其中X为L-苏氨酸。

3、根据权利要求1所述的新型胰岛素衍生物，其特征是：其中的C_nH_2n+1NH与X的羧基之间为酰胺键连接。

4、根据权利要求1所述的新型胰岛素衍生物，其特征是：其中X的氨基与D的C末端B29赖氨酸的羧基之间是酰胺键连接。

5、新型胰岛素衍生物的制备方法，其特征是：具体合成步骤为：

第一步脂肪胺的制备：将一定量的通式为C_nH_2n+1OH的直连饱和脂肪醇(n＝14-22)加入到甲苯中，加热共沸除去水分，余下的溶液加入与脂肪醇等摩尔量的吡啶，回流反应并滴加2倍脂肪醇摩尔量的氯化亚砜(SOCl₂)滴加完毕后再于80℃反应2-6小时，冷却过滤除去结晶物，然后减压蒸馏除去甲苯，得到的产物为C_nH_2n+1Cl，将该物质放入反应釜中，以少量无水甲醇溶解，然后加入过量的液态氨，密闭下60℃反应12-24小时，开釜后减压除去过量的氨和甲醇，得到通式为C_nH_2n+1NH₂的脂肪胺(n＝14-22)，备用；

第二步C_nH_2n+1NH-X的制备：取一定量的氨基用Fmoc保护了的氨基酸衍生物，其化学通式为Fmoc-HN-X-(COOH)，X为氨基酸残基，溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂)与二甲基甲酰胺(DMF)的混合溶液中，加入Fmoc-HN-X-(COOH)等摩尔量的备用的C_nH_2n+1NH₂，再加入2倍Fmoc-HN-X-(COOH)摩尔量的碳二亚胺(DCC)，0-10℃搅拌反应12-24小时，然后过滤除去副产物DCU，得到的溶液中加入过量的哌啶，搅拌反应脱掉Fmoc保护基，得到C_nH_2n+1NH-X，备用，此时X的羧基与脂肪胺形成酰胺连接，氨基为游离状态；

第三步去掉B30氨基酸残基的胰岛素中间体D的制备：在pH8.3的碳酸氢铵溶液中加入天然的猪胰岛素或人胰岛素，使之溶解，然后加入催化量的羧肽酶A，在37℃水浴中作用2小时，然后加酸终止反应，反应液用SephadexG50分离，冻干，得到脱掉B30氨基酸的胰岛素中间体，其B链N末端为B29-Lys，备用；

第四步新型胰岛素衍生物的制备：首先将一定量备用的脱掉B30氨基酸残基的胰岛素中间体用0.5-2N的醋酸溶液溶解，得溶液1；然后将备用的C_nH_2n+1NH-X溶于无水乙醇与二甲基甲酰胺(EtOH/DMF)的1∶1-1∶6体比积混合溶液中，得溶液2；原料胰岛素中间体与C_nH_2n+1NH-X的摩尔比为1∶20-1∶100，最后溶液1和2合并并调节pH至6-7，加入催化量的胰蛋白酶，在20-35℃的水浴中反应12-24小时，即可得到本发明的终产物——B30的氨基酸残基的羧基被脂肪胺修饰的新型胰岛素衍生物。

6、根据权利要求4所述的新型胰岛素衍生物的制备方法，其特征是：第一步脂肪胺的制备中滴加吡啶完毕后反应时间为4小时。

7、根据权利要求4所述的新型胰岛素衍生物的制备方法，其特征是：第一步脂肪胺的制备中加入液态氨反应时间为18小时。

8、根据权利要求4所述的新型胰岛素衍生物的制备方法，其特征是：第二步C_nH_2n+1NH-X的制备反应温度为4℃，反应时间为18小时。