[发明专利]一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法

权利要求书

1.一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法，其特征包括以下步骤：

(A)将溶于磷酸盐缓冲液a中的水蛭素上样于经相同缓冲液平衡的离子柱中，直至全部样品吸附于离子交换介质上，没有洗脱物流出为止；

(B)将溶于a液中的活化聚乙二醇溶液上样于步骤A的柱中，至全部溶液充满离子柱，停止上样；

(C)待反应结束后，用a液冲洗步骤B的反应离子柱，至无洗脱物流出；用含有氯化钠或氯化钾的a液对步骤B柱子中物质进行洗脱，并收集洗脱组分。

2.根据权利要求1所述的一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法，其特征在于，步骤A中的水蛭素包括天然提取水蛭素、重组水蛭素各类变异体，其浓度范围1～10mg/ml；所使用离子柱为强阴离子交换柱，带电基团为季氨基；柱中基质为交联葡聚糖或琼脂糖，平均粒径范围为30～90μm；磷酸盐缓冲液a的pH范围为6～9，浓度20～50mM。

3.根据权利要求1所述的一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法，其特征在于，步骤B中聚乙二醇分子量在5kDa到35kDa之间，优选的聚乙二醇分子量为20kDa；聚乙二醇的活化形式包括各种以修饰氨基为目标的活化形式，如羰基二咪唑法活化，琥珀酰亚胺碳酸酯活化；聚乙二醇与水蛭素摩尔比范围3∶1～9∶1，反应时间15～120min。

4.根据权利要求1所述的一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法，其特征在于，步骤C中洗脱缓冲液为含有1～2M氯化钠或氯化钾的a液，洗脱方式为梯度洗脱，修饰产物先于原蛋白洗脱，洗脱时间60～120min。