[发明专利]山茶黄酮素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然植物南山茶种子中活性成分的提取制备方法，尤其涉及黄酮类物质的提取纯化方法。

背景技术

南山茶(Camellia semiserrata Chi)系山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)植物，分布于广西的东南部至广东西南部，海拔250～500米山地，是一种资源丰富的重要油料树种，种子油分质量好，且叶片漂亮、花朵硕大，作为油料和花卉树种，除野生外亦大量栽培。但药用价值国内外至今未见报道。

本发明人对山茶属植物的研究始于2002年，先后赴山茶属植物的主产区广西、云南、湖南进行了资源调查。在资源调查的基础上，发明人对采集到的种子、果皮、叶及榨油后的种粕等原料进行了抗骨质疏松、抗肿瘤、抗生育、抗真菌、抗寄生虫及抗杀软体动物的活性筛选。以维甲酸所致骨质疏松大鼠的活性筛选中发现，南山茶种粕95％乙醇提取物具有非常强的抗骨质疏松作用，明显高于阳性对照药。通过重组人雌(孕)激素受体基因酵母法对95％乙醇提取物不同萃取部位的活性筛选，确认其有效组分主要是乙酸乙酯层(黄酮含量44％)，其次是正丁醇层(多酚含量26％)。通过定性、定量及活性验证，证明其有效部位为以黄酮类成分为主的有效部位群。为了进一步研发及产品开发的需要，有必要对此类物质的提取纯化方法进行研究。

发明内容

基于上述种种因素的考虑，本发明的目的即在于提供一种制备高纯度山茶黄酮素的完整技术方案。

本发明所述的山茶黄酮素的制备方法是：首先以榨油后的南山茶种粕为原料进行溶剂提取，提取溶剂是浓度为60～90％的乙醇-水溶液，提取时间1～5h，提取温度60～100℃，料液比(g:ml)＝1:5～25，提取次数1～4次；提取物浓缩干燥后转溶于水、过滤，滤液经DiaionHP-20大孔树脂吸附后，用去离子水洗脱杂质，然后以浓度20～50％的乙醇-水溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥后得山茶黄酮素产品。

其中，所述的提取溶剂优选浓度为60～80％的乙醇-水溶液，提取时间优选1.5～2.5h，提取温度优选80～90℃，料液比(g:ml)优选1:15～25，提取次数优选2～3次。

其中，更为优选的是：提取溶剂浓度为70％的乙醇-水溶液，提取时间2.5h，提取温度80℃，料液比(g:ml)1:20，提取次数2次。

上文所述的任意一种山茶黄酮素的制备方法中，对DiaionHP-20大孔树脂纯化步骤的优选方案是以浓度20～30％的乙醇-水溶液进行洗脱；最优选25％的乙醇-水溶液。

上述方案中的DiaionHP-20大孔树脂纯化步骤中，用于洗脱杂质的去离子水用量优选3倍树脂量(ml/g)，洗脱液用量为13～14倍树脂量(ml/g)。

基于上述内容，本发明的山茶黄酮素的制备方法较为优选地包括如下技术步骤：

①将原料南山茶种粕粉碎；

②以浓度为70％的乙醇-水溶液为溶剂，按料液比(g:ml)＝1:20浸提原料2次，每次2h，提取温度80℃；

③提取液浓缩干燥后转溶于水并过滤；

④滤液经DiaionHP-20大孔树脂吸附后，用3倍树脂量(ml/g)的去离子水洗脱杂质，然后以13～14倍树脂量(ml/g)的浓度25％的乙醇-水溶液洗脱；

⑤收集洗脱液并浓缩干燥，得山茶黄酮素产品。

上述方案中，所述的DiaionHP-20大孔树脂吸附上样溶液的山茶黄酮素含量最好9.3～9.4mg/ml。

由本发明所述的制备方法生产的山茶黄酮素纯度高、质量好，色泽佳；提取物纯化后黄酮含量超过50％，满足用于研制注册5类新药的含量标准；并且该方法操作简便易行，成本低，所用溶剂无毒；大孔树脂可再生重复使用，适于规模化生产。

附图说明

本发明附图1幅，即本发明的山茶黄酮素的制备方法的工艺流程图。

具体实施方式

下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。如无特殊说明，下述实施例中均采用NaNO₂-AlCl₃显色—分光光度法测定黄酮含量。

本部分所用南山茶种子于2006年3月采集于广西省平南县六陈镇，经中科院昆明植物所裴盛基教授鉴定为南山茶(Camellia semiserrata Chi.)种子。

本部分所使用的对照品：山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基-(6→1)-2″′，4″′-O-二乙酰基-α-L-鼠李糖基-(3→1)-2″″，3″″，4″″-O-三乙酰基-α-L-鼠李糖苷(黄酮苷A)由本发明人通过下述方法从南山茶种子中得到：