[发明专利]β－葡萄糖苷酶在转化白藜芦醇苷制备白藜芦醇中的应用

权利要求书

1.β-葡萄糖苷酶在转化白藜芦醇苷制备白藜芦醇中的应用，其特征在于，以下述步骤实现：

(1)菌种选择：选用桔青霉CGMCC 3.2938，少根根霉CGMCC No.1963，杨奇青霉CGMCCNO.0668，绿色木霉CGMCC No.1962，毛霉CGMCC NO.0151，黑曲霉CGMCC 0496，黑曲霉CGMCC 0751，土曲霉CGMCC No.0569中的一种菌作为产β-葡萄糖苷酶的菌种；

(2)制备β-葡萄糖苷酶粗酶液：将步骤(1)所述菌种以常规量接种于β-葡萄糖苷酶产酶培养基中，在25℃～50℃，摇床转速120～220rpm的条件下，产酶发酵12～144小时，然后将所有发酵物在5000～10000r/min的转速下离心15～40min，收集上清液即获得β-葡萄糖苷酶粗酶液；

(3)酶转化白藜芦醇苷反应：取含有白藜芦醇苷的植物样品，将其粉碎至60目，然后按1g粉碎的样品比5～10ml粗酶液的比例，向粉碎的样品中加入步骤(2)制得的β-葡萄糖苷酶粗酶液，充分搅拌后于25℃～45℃条件下静置转化反应10～24小时；或充分搅拌后置于25℃～45℃、摇床转速80～180rpm条件下转化反应5～24小时；

(4)转化液收集：将步骤(3)转化反应后的所有物料以4000～8000r/min条件离心10～15min，收集上清液即得含白藜芦醇的溶液；

(5)白藜芦醇的提取纯化：向步骤(4)获得的含白藜芦醇的溶液中加入其1倍体积量的50～95％的乙醇，在50℃～100℃温度下进行加热回流提取，得纯β-葡萄糖苷酶转化产物——白藜芦醇液。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产β-葡萄糖苷酶的菌选桔青霉CGMCC3.2938，少根根霉CGMCC No.1963，绿色木霉CGMCC No.1962，毛霉CGMCC NO.0151，黑曲霉CGMCC 0496，土曲霉CGMCC No.0569中的一种。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶产酶培养基的配方为：10～40g/L麦麸，10～40g/L草粉，5～10g/L硫酸铵或3～5g/L尿素，0.5～5ml/L微量离子液；其中，所述微量离子液是如下组分量的溶液：FeSO₄ 0.5ml/L、MnSO₄ 0.16ml/L、ZnSO₄ 0.14ml/L、CoCl₂ 0.2ml/L。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述温度为28～38℃，所述摇床转速为150～220rpm，所述产酶发酵时间是24～120小时。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述离心条件是5000～7000r/min的转速下离心20～30min。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中所述含有白藜芦醇苷的植物样品是指虎杖、花生根、花生、葡萄皮、黎芦、何首乌之一。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(3)中所述温度为28～38℃，所述摇床转速为120～160rpm。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(4)中所述离心的转速是4000～6000r/min。

9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(5)中所述乙醇的体积百分比浓度是75％～95％。

10.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(5)中所述乙醇加热回流提取白藜芦醇的温度是60℃～80℃。