[发明专利]微矩阵快速筛选阳性单克隆抗体试剂盒及其制备、使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及到阳性单克隆抗体的筛选方法的改进，具体的讲就是微矩阵快速筛选阳性单克隆抗体试剂盒及其制备、使用方法，其属于免疫学检测技术领域。

背景技术

1975年Koohler和Milstein创造了杂交瘤技术，经过不断提高，单克隆抗体已经应用于生物学各个领域。主要(1)在食品检测上的应用，具有高度的准确性和敏感性。(2)应用单克隆抗体对病原体进行分型和对抗原结构进行精细研究。(3)用于抗原物质的纯化。(4)在肿瘤方面，研究肿瘤特异性抗原；使用单克隆抗体联接抗肿瘤药，使它尤如导弹一样能准确捕获肿瘤细胞并将其杀死。(5)基础学科上已广泛用于病理、免疫、遗传等学科的研究。(6)在繁殖内分泌学上的应用，促进了生殖生理的发展。(7)在医学界，兽医界，用于诊断与治疗等。

由于单克隆抗体的广泛应用，单克隆体制备就越显重要，其制备方法也不断改进与探索，但目前仍以常规方法制备单克隆抗体，常规单克隆抗体制备过程是：免疫原的制备，免疫Balb/C小白鼠，进行细胞融合，筛选阳性细胞株，克隆这样几个主要步骤。在制备单克隆抗体中，最难的是选用何种方法来筛选阳性细胞株，因筛选工作量较大，因而快速，简单，准确的筛选方法是科学家们一直探索和追求的。目前常采用的筛选方法主要是间接ELISA检测，间接免疫荧光检测。制备单克隆抗体的常规抗原主要有三种来源：(1)微生物抗原，主要包括各种病原体，如真菌，细菌，病毒等，此类微生物制备的单抗主要用于诊断和治疗以及微生物精细形态的研究，此类抗原的来源多从生病的人类、家畜、水产养殖动物等体内提取，或是体外培养分离而来，在分离提纯抗原时，很难将抗原提的很纯，或多或少含有一定的组织抗原或是培养基抗原(以下将这些抗原统称为基质抗原)，用ELISA筛选则必须加一基质抗原对照，通过对比筛选出阳性细胞株。来源96孔细胞培养板上同一孔中的抗体，需在酶标板上分入两孔进行检测，一是抗原，二是基质抗原，通过OD值得测量和计算比较才能得到结果，较为繁琐，达不到直观，简便，快速的筛选。另外，来源96细胞培养板上同一孔中的抗体约50-100μL，量较少，再分入两孔进行检测，其量更少则使检测的灵敏度，精确度降低。用间接免疫荧光检测筛选，一是必须有含一定量的抗原的病理组织，二是工作量较大，每次可能需要制备并检测上百张免疫荧光片子。(2)半抗原，在免疫原制备中需加载体，其载体就相当于基质抗原，在ELISA筛选中也存在以上同样问题。间接免疫荧光检测一般不用于此类单抗的筛选。(3)组织抗原，此类抗原提纯中，也有基质抗原存在，因而，用ELISA筛选也存在以上同样问题，此类单抗主要用间接荧光筛选。因此，目前，在单克隆抗筛选中，迫切需要一种直观，快速，简便，高通量准确的筛选方法，并能用于任何一种抗原产生的单克隆抗体的筛选

发明内容

本发明是针对在单克隆抗筛选中，迫切需要一种直观，快速，简便，高通量准确的筛选方法，并能用于任何一种抗原产生的单克隆抗体的筛选而设计发明的，以达到直观，快速，简便，高通量准确的筛选阳性单克隆抗体的目的。

本发明以现有的技术的实际特点，由于其一，现用于阳性单克隆抗体筛选方法的繁琐，复杂，不直观，如ELISA筛选，抗体不能在同一孔中分别与抗原和基质抗原结合来筛选阳性抗体，必需分孔检测，造成用于筛选的抗体量更少，使其检测精确度降低；再是每一实验孔检测结果都要与其相应基质抗原对照孔检测结果计算比较，因而较繁琐，不直观。其二，间接荧光筛选，虽精确，直观，但不一定有合适的病理组织用于筛选，再是工作量大。而且以上无论是ELISA还是间接荧光筛选，每种方法检测时间至少需要2-3h，并且需要一定的设备与仪器。因而，目前在单克隆抗筛选中，迫切需要一种直观，快速，简便，高通量准确的筛选方法，并能用于任何一种抗原产生的单克隆抗体的筛选。因此，本发明针对现有检测方法存在的问题，利用免疫金渗滤原理，提供了一种微矩阵快速筛选阳性单克隆抗体试剂盒及其制备、使用方法，达到了直观，快速，简便，高通量准确的筛选的目的，并可用于任何一种抗原产生的单克隆抗体的筛选和克隆。

本发明是由以下技术方案实现的，研制一种微矩阵快速筛选阳性单克隆抗体试剂盒，其包括：微孔盖板，微矩阵点样板，硅胶板，硝酸纤维素膜，吸水层，底板，微量点样笔，A液：含牛血清白蛋白吐温-磷酸盐缓冲液，B液：胶体金标记的抗鼠IgG，C液：吐温磷酸盐缓冲液。

所述微孔盖板：为96孔，上下贯通，其排列方式以及孔的标识同96孔培养板，孔的底面积为25-55mm²，板的厚度为4-8mm，其材质为亚克力，或是塑料，或是化纤。