[发明专利]一种鉴定水稻香味的方法及与香味性状共分离的分子标记

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定水稻香味的方法及与香味性状共分离的分子标记，属分子遗传学领域，专用于水稻香味品种的选育与遗传研究，并可用于克隆香味基因。

背景技术

香味是水稻重要的食味品质性状。许多优良的水稻品种具有令人愉快的香气，备受消费者的欢迎，世界上每个水稻生产国或地区均有香稻种植。

目前对香味的测定方法主要有咀嚼籽粒法、氢氧化钾法、高效液相色谱法，前两种方法是通过嗅觉来进行的，咀嚼籽粒法大批量鉴定时会对舌头和鼻子造成影响，氢氧化钾法对香味的释放也有一定的局限性，鉴定不准。高效液相色谱为香味的测定提供了客观的方法，但该方法需要大批的样品量，而且费时(Jin et al.，2003)。

在香稻选育方面，利用分子标记辅助选择可以准确、简单、快速地选育香稻。许多研究者对香味基因的遗传分析和定位进行了研究，并为香稻育种提供了一些有用的分子标记，但是目前所利用的分子标记距离较远，对香味不能准确鉴定。

到目前为止，大部分研究表明稻米香味是受一个隐性单基因控制的。Ahnet al.(1992)利用一对近等基因系Lemont和香Lemont，香Lemont的香味基因来自供体Della，以有香味分离的F₃群体为材料，通过RFLP分析表明，香味基因与位于第8染色体上的RG28连锁，遗传距离为4.5cM。李欣等(1995)以籼型及粳型标记基因系为材料，分别与武进香籼、武进香粳杂交，以碱浸法测定双亲和F₁、F₂、及部分F₃组合的叶香，结果表明香味基因与位于第8染色体上的标记基因v-8表现连锁，估算两者的重组值约为38.03％±3.84％。Jin etal.(1995)用CT9993/KDML105的F₂分离群体为材料，找到一个RAPD引物，这个引物只在非香群体中扩增到1.5kb片段，并表现与香味性状紧密连锁，用该引物对两亲本、F₂分离群体单株和其它不同品种进行分析，进一步证明了这种多态的可靠性。Lorieux et al.(1996)以DH群体为材料，利用RFLP、RAPD、STS和同工酶标记及气相色谱测定AcPy的浓度，证实了AcPy是香味的主要成分，且香味基因与RG28相连锁，距离为5.8cM，同时鉴定出2个QTL，一个位于第4染色体，另一个位于第12染色体。Garland et al.(2000)根据RG28在一对香稻与非香稻品种之间的多态性区域发展了一个微卫星标记SCU-RICE-SSR-1，并选择附近区域的4个SSR标记对24个香稻和非香品种进行标记的多态信息量分析，研究表明，SCU-RICE-SSR-1、RM42和RM223可以用来区别不同品种中的香味基因的复等位基因。Jin et al.(2003)找到了一个与香味基因连锁的SNP标记RSP04，用RSP04对50个单株构成的F₂分离群体进行基因型分析，发现RSP04与香味基因之间有两个重组株，RSP04与香味基因相距2cM；用RSP04对另外一个163个单株构成的F₂分离群体进行基因型分析，发现RSP04与香味基因之间有6个重组株，RSP04与香味基因相距约2cM。Dong etal.(2001)对三个日本当地香稻品种的三体遗传分析表明，这三个香稻品种的香味是由一个隐性基因控制的，均属等位基因，位于第8染色体上。Siddiqet al.(1986)对一个印度品种进行三体遗传分析，发现有两个隐性香味基因，分别位于第5和第9染色体。Chen等(2006)把香味基因座定位在一个69kb的区间内。施军琼(2004)利用单片段代换系对香味基因进行了初步定位，在两个分离群体中香味基因均与RM223共分离，在以Basmati 385为供体的分离群体中，香味基因距两侧标记RM515和RM284分别为2.7cM和3.3cM，在以美国茉莉香为供体的分离群体中，香味基因距两侧标记RM515和RM210分别为2.9cM和11.8cM。

利用分子标记对水稻香味基因的分子标记辅助选择的技术国内外均有报道，但迄今为止，关于水稻香味基因共分离的标记还未见报道，利用TPS溶液鉴定香味性状也是第一次报道。