[发明专利]一种蓝藻污染水微囊藻毒素检测方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种水质检测方法，特别是一种蓝藻污染水微囊藻毒素检测方法。

(二)背景技术

(1)世界各地25％-70％的蓝藻水华可产生毒素，在有毒性的7个属的蓝藻中，主要产毒的是鱼腥藻(Anabaena Bory)、束丝藻(Aphanizomenon Morr.)和微囊藻(Microcystis Kütz)属中的某些品系，其中微囊藻毒素是一类分布最广泛且与人类关系最为密切的七肽单环肝毒素，是强烈的肝脏肿瘤促进剂。微囊藻毒素通常大部分存在于藻细胞内，当细胞破裂或衰老时毒素释放进入水中，国内外已有大量文献报道证实湖泊水库及饮用水中发现微囊藻毒素。

微囊藻毒素的检出，对现行饮用水安全评价指标体系构成冲击，需要重新评价当前水厂主流处理工艺，例如，再也不能像从前一样放心地使用氯氧化技术、随意地选用各种净水药剂，因为使用不当，会破坏藻体，释放胞内微囊藻毒素，影响水质安全。为此，世界卫生组织(WHO)和西方发达国家均制定了饮用水及其水源水中微囊藻毒素不得超过1μg/L的控制标准，加拿大的标准更为严格(0.5μg/L)，我国卫生部2006年新出台的“生活饮用水卫生标准”也规定了1μg/L的限制标准，显示了国际供水界及公众对饮用水中微囊藻毒素的广泛关注。

(2)然而令人遗憾的是，微囊藻毒素的检测方法尚存在诸多技术缺陷，世界卫生组织推荐的检测方法实用性及通用性不强，还不够成熟，这在一定程度上影响了饮用水中微囊藻毒素的监测与控制。

(三)发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种高效、简便、灵活的蓝藻污染水微囊藻毒素检测方法，使其能提高饮用水中微囊藻毒素的监测控制的准确性。

为了解决上述技术问题，本发明包括以下步骤：

(1)水样过滤，分离出藻类，胞外微囊藻毒素留在水相中；

(2)将分离出的藻类冻融、酸解、离心萃取，得含胞内微囊藻毒素的上清液；

(3)将步骤(1)中的水相和步骤(2)中的上清液分别进行或合并在一起后再进行反相固相萃取得微囊藻毒素和非极性杂质的洗脱液、再将该洗脱液正相固相萃取得微囊藻毒素洗脱液；

(4)测定步骤(3)所得微囊藻毒素洗脱液中微囊藻毒素的种类和数量。

为了便于本方法的实施，所述步骤(2)中藻类冻融采用液氮冻融，酸解采用乙酸酸解，所述步骤(3)中反相固相萃取采用C18反相柱，所述的正相固相萃取采用硅胶正相柱。

为了使方法灵活，易于操作，所述步骤(4)通过酶联免疫法测定步骤(3)所得微囊藻毒素洗脱液中微囊藻毒素总量，通过高效液相色谱法测定步骤(3)所得微囊藻毒素洗脱液中微囊藻毒素种类和含量。酶联免疫法可以快速测定微囊藻毒素总量，高效液相色谱法可对藻毒素进行定性定量。

本发明的有益效果是：本发明采用冻融酸解使胞内微囊藻毒素充分释放，采用“反相-正相”两级固相萃取使微囊藻毒素富集纯化，然后分别进行微囊藻毒素总量测定或准确定性定量分析。可方便检测胞内微囊藻毒素和胞外微囊藻毒素，也可一次测定总的微囊藻毒素，本发明高效、简便、灵活，本发明方法的使用能提高饮用水中微囊藻毒素的监测控制的准确性。

(四)具体实施方式

具体实施例一

本具体实施例包括如下步骤：

(1)将10L蓝藻污染水通过滤膜过滤，过滤后的藻类用纱布包好，胞外微囊藻毒素留在水相中；

(2)将过滤得的藻类置入液氮罐中保持1min，然后放入离心试管，加以5％乙酸10mL，在3600r/min下离心萃取9分钟，重复萃取3次，合并上清液。

(3)将步聚(1)所得的水相和步骤(2)所得上清液合并在起进行反相固相萃取得微囊藻毒素和非极性杂质的洗脱液、再将该洗脱液正相固相萃取得微囊藻毒素洗脱液；

反相固相萃取包括以下步聚：

a反相柱准备：先用10mL甲醇清洗并活化反相柱，再加15mL超纯水将活化好的反相柱条件化。

b反相柱富集：将水样以4mL/min的滤速通过反相柱，过滤完成后，用12mL的甲醇水混合液(φ甲醇＝20％)清洗反相柱，干抽5min后，用2ml甲醇洗脱。

正相固相萃取包括以下步聚：

a 正相柱准备：用10mL甲醇清洗并活化柱床，再用10mL的甲醇水混合液(φ甲醇＝20％)将活化好的正相柱条件化。