[发明专利]一种粗毛栓菌及其培养方法与应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种担子菌，尤其涉及一种耐热性漆酶产生真菌菌株粗毛栓菌，属微生物技术领域。

(二)背景技术

漆酶是一种含金属离子的糖蛋白，属于多铜氧化酶家族，它分布于动物、植物、真菌、细菌当中，特别是在真菌和细菌中广泛存在。漆酶能够利用氧气作为电子供体直接氧化芳香族化合物底物或者介体，还可以在介体的介导作用下氧化大分子的木质素或者氧化还原电势较高的非酚型芳香族化合物。

热稳定性是限制漆酶广泛应用的一个瓶颈，分离得到热稳定性好的菌株对于扩大漆酶的应用范围、延长漆酶的应用时间、降低漆酶的应用成本有着重要的意义。漆酶被首先发现于植物中，随着人们的研究表明漆酶并非仅仅存在于植物中，而且漆酶也不仅仅是人们所认为的四聚体，还存在着二聚体和单体的漆酶蛋白。随着分子生物学的发展特别是基因组测序物种的日益增多和Blast技术和同源模建技术的发展人们发现漆酶在细菌中也是广泛存在的。不论是真菌中的漆酶还是植物、细菌以及动物中的漆酶在其序列方面表现出了很大的差异，而且在酶学性质上也表现出很大的差异。目前发现的耐热性好的漆酶多集中在细菌中，但其存在着产量低、对金属铜离子依赖等局限，而高产的真菌菌株并不多见。目前，耐热性的漆酶在纸浆造纸、印染废水处理、食品工程以及有机合成当中已经被使用，高产、耐热的漆酶在工业生产中有着重要的应用前景。

(三)发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种具有高产耐热性漆酶的菌株粗毛栓菌(Trameteshirsuta)lg-9及其培养方法与应用。

一种粗毛栓菌(Trametes hirsuta)lg-9，该菌种已经于2008年03月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.2422。

本发明涉及的粗毛栓菌lg-9是从蒙山通过选择性培养基分离得到的一株担子菌。该菌株在采集子实体后，通过选择性培养基分离得到，通过与本实验室收藏以及分离得到的产漆酶菌株进行对比发现该菌株生长迅速，具有较高的产漆酶能力且产生的漆酶具有很强的温度耐受性。该粗毛栓菌lg-9具有如下生物学特征：

活化后的粗毛栓菌lg-9在麸皮浸出液培养基上生长迅速，5天左右能长满10cm平板，初生菌丝白色，随着时间的延长菌丝变黄。该菌能够产生子实体，子实体无柄，侧生，木栓质。菌盖1.5～5.0cm×2～8cm，厚5～25mm，有白色或黄白色的粗毛束，有同心环带。菌肉白色到黄白色，担孢子球棒状，大约10μm×3μm不等。菌丝体能够在顶端产生锁状联合。在液体产酶培养基震荡培养条件下能够产生白色的球状菌丝体。

上述粗毛栓菌(Trametes hirsuta)lg-9CGMCC No.2422的ITS核苷酸序列(包括18SDNA和28SDNA的一部分以及5.8SDNA和三者之间的两段间隔序列)长度为651个碱基，如序列表SEQ ID No.1所示。通过美国生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation，NCBI)序列同源性分析，将本发明的菌株粗毛栓菌(Trametes hirsuta)lg-9CGMCC No.2422的ITS核苷酸通过Blast进行比对，比对结果表明该菌株属于粗毛栓菌。结合该菌株的子实体形态分析以及菌丝体形态分析和孢子的形态分析根据《真菌鉴定手册》(魏景超著)表明该菌株属于真菌担子菌属中的粗毛栓菌。

一种粗毛栓菌lg-9的培养方法，具体步骤如下：

取菌种保藏编号为CGMCC No.2422的粗毛栓菌lg-9菌株，将该菌株接种至麸皮浸出液斜面培养基或者PDA固体斜面培养基活化3～5天，温度为28～30℃，取活化后的粗毛栓菌lg-9接种于麸皮浸出液发酵培养基中扩大培养，培养温度为28～30℃，震荡型摇床的速度为70转/分钟，培养6～8天。

优选的，所述麸皮浸出液斜面培养基通过如下方法制得：

麸皮195～205g加到1L水中，沸煮30min，六层纱布过滤，添加19.5～20.5g琼脂，自然pH，121℃灭菌20min。

优选的，所述PDA固体斜面培养基通过如下方法制得：

马铃薯195～205g去皮片状，沸煮30min过滤，葡萄糖18～22g，蒸馏水1000mL，琼脂20g，pH＝5.5～6.5，115℃灭菌30min。

优选的，所述麸皮浸出液培养基通过如下方法制得：

麸皮195～205g加到1L水中，沸煮30min，六层纱布过滤，自然pH，121℃灭菌20min。