[发明专利]一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种大分子化合物的测定方法，特别是涉及一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法。

背景技术

海参多糖是海参中一种重要的活性成分。海参中多糖类化合物结构复杂，且因海参种类和生长环境的不同而有差别。不同种类海参中的多糖结构不同，而同种海参中海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)和海参硫酸软骨素(SC-CHS)的含量也不尽相同。另外，海参中还含有大量的蛋白质、多糖、脂肪、微量元素等复杂成分，这必然会给海参中总多糖的测定带来很多困难。

目前已有关于海参中多糖含量测定方法的报道，如申请号为200410036250.7的“测定海参多糖含量的方法”，该方法对干海参样品经碱溶，超声提取，二次醇沉等步骤，最后将样品干燥至恒重后测得多糖含量，但该方法对目标测定物的选择性不强，样品中的杂质如盐、微量元素、蛋白质等成分易引起较大的测定误差，且不适合海参制品中海参多糖含量的测定；申请号为200410048001的“测定芦荟多糖的新方法”采用了分光光度法测定芦荟多糖，具有较好的重复性和精密度，然而因为海参多糖中含有葡萄糖醛酸和氨基糖，在该方法中不显色，所以也不适合海参多糖含量的测定；近年来以高效液相为基础的海参多糖的定量方法发展较快，如申请号为200410052907.9的“一种多糖定量检测方法与系统”，该方法灵敏准确，但对设备要求较高，而且该方法通常适用于以中性糖含量为主的多糖，海参多糖中的含有较高含量的糖醛酸和氨基糖，用该方法不能够柱后显色。另外，海参多糖中两种糖的种间差异大，无法确定具体以何种多糖作为标准品进行分光光度或者液相色谱测定。随着人们生活水平的提高，与海参相关的食品、保健品和药品日益成为市场消费的热点和主流。海参多糖作为主要的活性成分，其含量对其食用及药用价值影响很大，是不可或缺的海参营养评价指标。因此迫切需要建立一种简便可信的海参多糖测定方法。而市面上目前的海参制品品种复杂，因此采用简单的分光光度法或称重法很难满足以海参多糖为评价指标建立海参制品质量标准的要求。

发明内容

本发明目的在于提供一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法，它无需复杂的前处理，取样少、简便、灵敏、快速、准确，能满足以海参多糖为评价指标建立海参制品质量标准的要求。

一种海参及海参制品中海参多糖含量的测定方法，其特征在于：(1)取海参或海参制品，用蛋白酶于缓冲业液中酶解，将酶解液离心，取上清液用2-5倍体积的乙醇使海参多糖沉淀，离心，所得沉淀用水溶解后定容至1-100ml；(2)取0.1-1ml所得水溶液，加入等体积0.5-6mol/L的三氟乙酸水溶液，氮气封管，在100-120℃下水解1-12h；将所得水解液吹干和/或加碱中和，用水定容至0.1-10ml，过滤，作为供试液；(3)精确称取岩藻糖标准品，配成浓度为0.01mmol/L-1mmol/L呈梯度的多个标准水溶液；(4)分别精密吸取相同体积的上述多个标准水溶液，分别加入0.1-0.5mol/L的NaOH水溶液和等体积的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生试剂，50-70℃下水浴衍生0.2-2h，冷却，用酸的水溶液中和至中性，用氯仿萃取，吸弃下层，重复萃取2-6次，将水层过滤，进行液相色谱分析，得到分离谱图，以所得谱图中岩藻糖的峰面积对岩藻糖的浓度进行线性回归，得到回归方程；(5)取上述供试液进行衍生和液相色谱分析，以岩藻糖衍生物的峰面积代入上述回归方程中，求出样品中岩藻糖的含量；将岩藻糖的含量乘以转化系数即得海参样品中海参多糖的含量。

本发明的优点在于(1)操作简便，只需对样品进行简单的粗提取等预处理，便可以直接经过酶解进行水解。(2)灵敏度高，岩藻糖衍生物在250nm有很强的吸收，检测限可以达到0.37μM。(3)取样少，所需海参样品可小于0.01克干重。(4)适用范围，可同时应用于固态、液态等多种海参制品中海参多糖含量的测定。(5)检测时间短，单个测定耗时仅为3h左右；由于可同时进行水解、衍生等步骤，因此也适用于大批量测定。(6)稳定性好，24小时内岩藻糖衍生物峰面积稳定，RSD＜2.5％。(7)本方法可同时测定海参制品中葡萄糖醛酸的含量，可同时用于鉴定海参制品中的实际添加海参样品量。

附图说明

附图1为单糖标准品高效液相色谱分离图。

附图2为刺参粗多糖的单糖组成分析图。

附图3为海参肽中海参多糖的单糖组成液相色谱图。

具体实施方式

实施例1海参肽中多糖含量的测定