[发明专利]微生物固体菌剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域：

本发明主要涉及微生物的发酵方法，尤其涉及利用食品行业产生的废液废渣制备酵母融合菌(F306)、白地霉菌(G361)和根霉菌(R)三菌组合的FGR固体菌剂的方法和应用。

背景技术：

传统的微生物菌剂的制备方法，所用原料是葡萄糖、蛋白胨、糖蜜、牛肉膏、维生素，无机盐和水配制成液体培养基，从试管斜面菌种上刮取菌苔接种在液体培养基中，经好氧或厌氧培养制备成液体菌剂或将液体菌种接种在由玉米粉、麸皮、豆面、籽饼、豆粕和米糠等原料组成的固料培养基上，发酵制备成固体菌剂。其缺点是：所用原料成本高，生产工艺复杂，不能节约能源。

传统的微生物菌剂制备所采用的微生物菌种大多是：从国家或地方菌种库或直接从自然界分离筛选出的菌种，其缺点是：1.微生物菌种的活性差；2.对有机物分解转化能力弱；3.这些菌种所制备的菌剂活细胞数少，大多数在10⁸个/克。

混合菌剂传统做法，是将各种不同的菌种(好氧和厌氧)在各自不同的生长环境中培养菌种，然后从每个菌种的培养物中刮取菌苔制取每个菌的液体菌悬液，再转种于各自的液体培养液经通气或厌氧发酵培养后离心制取活性细胞菌，将沉淀物喷雾干燥制成粉剂，制成多菌的混合。其缺点是：制备工艺复杂，发酵周期长，成本高，应用受到限制。

发明内容：

本发明的目的在于避免现有微生物固体菌剂生产技术不足之处而提供一种微生物固体菌剂及其制备方法和应用。

使用F306酵母融合菌与G361白地霉菌和根霉菌科学配伍，以新鲜豆腐或粉丝或玉米或洋芋淀粉产生的废渣及农业秸秆为原料，添加少量无机盐，培养料不灭菌，三种菌在同一条件下制备F306酵母融合菌、G361白地霉菌和根霉菌固体菌剂的制备方法。该方法是利用食品行业产生的废渣为原料，生产过程无“三废”污染，生产工艺简单，操作方便，节省人力，节省能源，其固体菌剂，即可用于有机废水净化剂，又可作为微生物饲料和微生物肥料，也可以用于石油开采、食品工业、环境工程、医疗和精细化工等行业。

本发明可以通过采用以下技术方案实现：一种微生物固体菌剂，其特点在于由F306酵母融合菌、G361白地霉菌(Geotrichum Candidum Link)、根霉菌(Rhizopus)和固体培养基组成，其三种菌株总量的重量百分比为F306酵母融合菌为55～65％、G361白地霉菌为30～35％、根霉菌5～10％，所述的F306酵母融合菌的保藏号为CGMCC 2461，保藏日期为2008年4月21日，分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae Hansen)。G361白地霉菌(Geotrichum Candidum Link)是中国科学院微生物菌种中心保存的安全菌种，编号为AS.2.361，根霉菌(Rhizopus)是市场公开销售菌种。

所述的固体培养基包括有重量百分比为以干料计50-80％的糟渣，15-30％的玉米芯粉，8-12％的麸皮，0.5-0.8％的玉米面，0.1-3％的尿素，0.2-4％的硫酸铵，再加入新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水使其含水重量百分比为45-65％，用1％的石灰水调pH 5.5-6.5。

所述的微生物固体菌剂的制备方法，其特点在于包括有如下步骤：

A.琼脂斜面培养基的制备及菌种的培养：

a.琼脂斜面培养基的制备：麦芽汁0.5-2％、葡萄糖0.5-2％、蛋白胨0.2-0.6％、琼脂粉1-3％、无菌水80-120ml，加热溶解后，用1％的氢氧化钠调pH值至5.5-6.5，经110-114℃，30-35分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于15×1.5cm的干燥灭菌的试管摆成斜面待凝固后备用；

b.菌种的培养：分别取F306酵母融合菌、G361白地霉菌和根霉菌的母种琼脂斜面菌，在无菌条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经28-32℃、24-48小时培养，即得琼脂斜面菌种，为一级菌种；

B液体培养基的制备及液体菌种的培养：

a.液体培养基的制备：在1升新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水中加入硫酸铵1-2g，磷酸0.5-1ml，用1％的石灰水调pH 5.5-6.5，分装于500ml三角烧瓶中，分装量为瓶子容量的1/4，然后经110-112℃，30-35分钟高压灭菌，冷却后备用；

b.分别取F306酵母融合菌、G361白地霉菌和根霉菌的一级菌种，在无菌条件下，接种于液体培养液中，经28-32℃、24-48小时培养，其培养液为二级菌种；