[发明专利]检测羊泰勒虫病的ELISA诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1、一种检测羊泰勒虫病的ELISA诊断试剂盒，其特征在于包括：

可与待测样品结合的固体支持物；

包被于可与待测样品结合的固体支持物上的羊泰勒虫裂殖子抗原，每孔0.1ug；

作为二抗的用酶标记的兔抗羊IgG；

标准羊泰勒虫阳性血清；

标准羊泰勒虫阴性血清；

明胶；

底物稀释液；

30％H₂O₂；

无色底物；

终止液；

磷酸盐缓冲液。

2、根据权利要求1所述的一种检测羊泰勒虫病的ELISA诊断试剂盒，其特征在于所述的固体支持物为酶标板；所述的底物稀释液为柠檬酸-磷酸盐缓冲液；所述的无色底物为邻苯二胺；所述的终止液是2摩尔的硫酸；所述的酶为辣根过氧化物酶；所述的磷酸盐缓冲液为25×浓缩PBST洗液。

3、一种制备如权利要求1所述检测羊泰勒虫病的ELISA诊断试剂盒的方法，其特征在于：

a.包被抗原：用0.05M PH9.6碳酸盐缓冲液稀释羊泰勒虫裂殖子抗原浓度至0.1ug/孔，将此稀释抗原按100ul/孔加入酶标板，加盖后37℃温箱放置1小时后，4℃冰箱过夜；

b.洗涤：用PH7.2 PBS+0.1％吐温-20洗涤包被抗原的酶标板4次；

c.封闭：碳酸盐缓冲液中加入0.5％明胶W/V，加热溶解后冷却至室温，每孔加入200ul，37℃温育30分钟后甩干；

d.洗涤：用PH7.2 PBS+0.1％吐温-20洗涤封闭后的酶标板4次；

e.风干后密封4℃保存。

4、根据权利要求1所述的一种检测羊泰勒虫病的ELISA诊断试剂盒的使用方法，其特征在于：

a.加被检血清：在PH为7.2的PBST中加入0.5％明胶，加热溶解，冷却至室温，用此液体按1∶400稀释血清，每孔加入100ul稀释血清，37℃温育1小时；

b.洗涤：用1倍PBST洗4次，PBS洗2次；

c.加酶标二抗：在PH为7.2的PBST中加入0.5％明胶，加热溶解，冷却至室温，用此液体按1∶800稀释辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG，，每孔加入100ul，37℃温育1小时；

d.洗涤：用1倍PBST洗4次，PBS洗2次；

e.加底物：每孔加入配好的邻苯二胺底物100ul，37℃避光放置约20分钟；

f.终止反应：每孔入50ul 2M H₂SO₄终止反应；

g.在酶标仪上492nm处读出OD值。