[发明专利]环介导等温扩增检测刚地弓形虫的试剂盒及方法无效
| 申请号： | 200810018652.2 | 申请日： | 2008-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN101250577A | 公开（公告）日： | 2008-08-27 |
| 发明（设计）人： | 朱斌;徐兰兰;葛海燕;杨志雄 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 马明渡 |
| 地址： | 215123江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 环介导 等温 扩增 检测 弓形虫 试剂盒 方法 | ||
1.一种环介导等温扩增检测刚地弓形虫的引物，其特征在于：由一对外引物和一对内引物组成，其序列为：
外引物1：GGGAATGAAAGAGACGCTAA
外引物2：CTGTGTACCTCTTCTCGTATT
内引物1：TGCACAGATACTCATGAATTTCACTGTTTGCATAGGTTGCAGTC
内引物2：ACTTTGGTGTATTCGCAGATTGGTTCACGATCTTCTTCTCCTG
其中，所述的一对外引物与一对内引物的摩尔数之比为1∶6～9。
2.一种环介导等温扩增检测刚地弓形虫的试剂盒，其特征在于：由一套引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和显色剂组成；所述的一套引物是由一对外引物和一对内引物组成，其序列为：
外引物1：GGGAATGAAAGAGACGCTAA
外引物2：CTGTGTACCTCTTCTCGTATT
内引物1：TGCACAGATACTCATGAATTTCACTGTTTGCATAGGTTGCAGTC
内引物2：ACTTTGGTGTATTCGCAGATTGGTTCACGATCTTCTTCTCCTG
其中，所述的一对外引物与一对内引物的摩尔数之比为1∶6～9；所述的DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活力为8个活性单位/微升；所述的阳性对照为含有插入刚地弓形虫一段特异序列的阳性质粒，环介导等温扩增反应扩增区位于该特异序列中，其浓度为107拷贝/μl；所述的阴性对照为灭菌双蒸水；所述的显色剂为20倍SYBR Green I。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述的10倍环介导等温扩增反应液是由200mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、40～100mM硫酸镁、4～10M甜菜碱、5～18mM的dNTPs、和1％质量百分浓度的曲拉通X-100组成。
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