[发明专利]芒果甙元在治疗Ⅱ型糖尿病中的应用及其体外试验模型

说明书

一、技术领域

本发明属于生物制药及分子生物学技术领域，具体涉及芒果甙元在治疗II型糖尿病中的应用。

二、背景技术

II型糖尿病的病因主要包括胰岛细胞功能异常和胰岛素抵抗。胰岛细胞功能异常是一种复杂的现象，包括对葡萄糖感应的丧失，导致GSIS(glucose-stimulated insulin secretion)损害等。

UCP2(Uncoupling Protein 2，解偶联蛋白2)是解偶联蛋白家族的成员，为一种位于线粒体内膜上的阳离子载体蛋白。它可以引起质子的渗漏，使氧化磷酸化解偶联，ATP合成减少，能量以热的形式散失。UCP2是胰岛素分泌的负调节分子。首先，它介导了线粒体内膜的质子渗漏，这已被一系列的研究所证明，这些研究的对象涵盖了原脂质体、线粒体以及完整细胞(Proc.Natl.Acad.Sci.，99：118-122，2002)。胰岛β细胞中，如果ATP/ADP比值增高，会使ATP敏感的K⁺通道关闭，细胞膜去极化，Ca²⁺内流，从而导致胰岛素分泌。UCP2介导的质子渗漏会减少ATP合成，损害胰岛素分泌，从而负调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion，GSIS)。ob/ob小鼠是肥胖导致的糖尿病动物模型，在该小鼠胰岛中，UCP2表达显著升高。另外，高血糖也能导致胰岛内UCP2表达升高。更重要的是，在ob/ob小鼠中敲除UCP2，胰岛素分泌的第一相能得到恢复，并且血清中胰岛素含量升高，高血糖症状也得到改善(Cell，105：745-755，2001)。这些结果充分说明，UCP2在高血糖以及肥胖导致的胰岛功能异常中发挥了重要作用。因此，有效抑制UCP2基因在胰岛等组织中的表达对治疗II型糖尿病有较大意义，具有该作用特点的药物可应用于II型糖尿病的治疗。

芒果甙元(norathyriol)是一种四羟基吡啶，是芒果甙的甙元。芒果甙属双苯吡酮类化合物，在漆树芒果树(Mangifera indica)，扁桃树(Mangifera persiciformis)的叶、果实、树皮，龙胆科植物东北龙胆(Gentiana manshurica kitag)、川西瘴芽菜(Swertia mussotii franch)，百合科植物知母(Anmarrhena asphodeloides bge.)，水龙骨科植物光石韦(Pyrrosia calvata(Bak)china)等多种植物中存在。药理学研究表明，芒果甙可降低糖尿病模型小鼠(KK-Ay mice)的血糖并提高其胰岛素耐量，对正常小鼠无明显作用(1.Biol Pharm Bull，21(12)：1389-90，1998；2.Phytomedicine，8(2)：85-7，2001)。有报道，人肠道内的一种厌氧菌会切断芒果甙的C-C糖甙键，生成芒果甙元(1.Biol Pharm Bull，28(9)：1672-78，2005；2.BiolPharm Bull，28(11)：2035-39，2005)。因此，我们以芒果甙元为研究对象，运用分子生物学手段，揭示芒果甙元可下调293A细胞UCP2基因的表达，提示芒果甙的降血糖和提高胰岛素耐量的作用可能是通过芒果甙元来实现的。

三、发明内容

本发明需要解决的问题是采用现代细胞生物学和分子生物学实验方法，研究芒果甙元作为一种治疗II型糖尿病的药物的应用及其分子作用机制，提出UCP2很有可能是中医寒热理论的一个重要效应分子，是芒果甙元作用的靶点。同时，建立一种治疗II型糖尿病的体外试验模型。

本发明的技术方案如下：

1.本发明采用芒果甙元进行体外试验。芒果甙元是一种四羟基吡啶，其结构式为：

(1)细胞培养、孵育方法及处理：

293A细胞用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液，在95％空气+5％CO₂的环境下培养于60mm培养皿中，细胞铺满培养皿80％左右时，弃去上清，加入含胎牛血清低于2％的DMEM高糖培养液和终浓度分别为10、50、100μM芒果甙元(用DMSO溶解，DMSO终浓度为0.1％)，对照组细胞不加芒果甙元。孵育24小时后弃去上清，加入Trizol 1mL，充分吹打后转入eppendoff管中，放置于-70℃冰箱中保存。

(2)细胞RNA的提取、RT-PCR和real-time PCR：