[发明专利]重组胎盘生长因子的表达生产、分离纯化及其化学标记

权利要求书

1.一种以重组基因工程、细胞培养及层析技术来表达及分离提取重组胎盘生长因子蛋白 的系统方法，其特征在于其包括下列步骤：

1)以多聚酶链式反应从细胞或组织中克隆获得含编码胎盘生长因子蛋白的cDNA；

2)扩增获得的cDNA经限制性内切酶处理后，再用T4连接酶将其与经相应的限制性 内切酶处理的表达载体相连，获得重组表达载体；

3)将上述重组表达载体转入宿主细胞，经筛选、扩增及诱导培养后获得高效稳定分泌 表达重组胎盘生长因子蛋白的宿主细胞；所述诱导培养在摇床培养中进行，以1％甲醇诱导； 所述宿主细胞为酵母细胞；

4)收集表达宿主细胞培养上清液，经离心及滤膜过滤后，加入1.8M氨水使发酵上清 PH值达到8.0，然后加入等体积结合缓冲液，平衡后，将滤液上样至DEAE-SEPHAROSE层析 柱中；所述结合缓冲液为PH＝7.4的50mM Tris·HCl和50mM NaCl混合液；

5)层析柱先以洗脱液去除杂蛋白，再以50mM NaAc+500mM NaCl，PH＝5.0的缓冲液洗 脱被吸附的蛋白并收集洗脱下的样品；

6)收集洗脱的蛋白再经调节pH至中性及透析与理化鉴定后，即获得纯化的重组胎盘 生长因子蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于编码胎盘生长因子蛋白的cDNA来自于哺 乳类生物的组织或细胞。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于编码胎盘生长因子蛋白的cDNA来自于人的组 织或细胞。