[发明专利]一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法

权利要求书

1.一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法，其特征在于：利用基因工程方法使得糖多孢红霉菌羟基化酶EryK基因删除，或删除包括有BC loop氨基酸序列对应的DNA片段，或对EryK羟基化酶基因插入失活，得到主产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体。

2.根据权利要求1所述的一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法，其特征在于：先用重叠PCR从糖多孢红霉菌基因组中，扩增出羟基化酶EryK中BC loop氨基酸序列缺失所对应的eryK基因DNA片段，将其连到质粒pWHM3上构建成重组质粒，再将重组质粒转化到糖多孢红霉菌中，使其发生染色体同源重组，筛选出EryK BC loop氨基酸对应DNA序列缺失的糖多孢红霉菌突变体，其发酵主产物为红霉素B。

3.根据权利要求1所述的一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法，其特征在于所述的删除或插入失活方法是指下列方法之一：(1)先用重叠PCR从糖多孢红霉菌基因组中扩增出羟基化酶基因eryK缺失或部分缺失的DNA片段，将其连到质粒pWHM3上构建成重组质粒，再将重组质粒转化到糖多孢红霉菌中，使其发生染色体同源重组，筛选出eryK基因删除或缺失的糖多孢红霉菌突变体，其发酵主产物为红霉素B；(2)使用PCR方法扩增出EryK羟基化酶基因eryK全部或部分DNA片段，将其连到质粒pWHM3上，构建成重组质粒，再将重组质粒转化到糖多孢红霉菌中，使其插入羟基化酶基因eryK上，使其表达的羟基化酶失活，所构建的孢红霉菌突变体，其发酵主产物为红霉素B。