[发明专利]一种多黏菌素E甲磺酸钠的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多黏菌素E甲磺酸钠的分离纯化方法，具体地涉及一种利 用膜分离技术从含有小分子量杂质的混合物中分离提纯多黏菌素E甲磺酸钠的 方法，此外还涉及一种通过控制反应条件，并利用膜分离技术制备高纯度多黏 菌素E甲磺酸钠的方法。

背景技术

多黏菌素E(colistin)是一个由多种组分组成的多肽类抗生素，主要由E₁和E₂组成(或称为A或B)。在20世纪50年代，多黏菌素E就应用于临床，主 要用于革兰氏阴性菌引起的感染，特别是由多重耐药绿脓杆菌引起的感染的治 疗。临床使用的多黏菌素E有两种，一种是口服或局部使用的硫酸多黏菌素E(也 称硫酸黏菌素)，另一种是供注射用的多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate Sodium)。多黏菌素E甲磺酸钠之所以能作为注射剂使用，是因为它的毒性较硫 酸多黏菌素E显著降低，LD₅₀降低了50倍以上。多黏菌素E甲磺酸钠是由1分 子的多黏菌素E和5分子的甲醛形成西佛氏碱后再同5分子亚硫酸氢钠通过共 价键结合而成。由于多黏菌素E是多组分药物，主要是由E₁和E₂组成，因此多 黏菌素E甲磺酸钠也是由多黏菌素E₁甲磺酸钠和多黏菌素E₂甲磺酸钠组成。多 黏菌素E₁甲磺酸钠的分子量为1749.82；多黏菌素E₂甲磺酸钠的分子量为 1735.80。

关于多黏菌素E甲磺酸钠的合成方法已属公知技术，就是由1分子的多黏 菌素E和5分子的甲醛形成西佛氏碱后再同5分子亚硫酸氢钠通过共价键结合 而成，具体合成反应为：以硫酸多黏菌素E为原料，用水溶解后，先加甲醛溶 液，然后再加亚硫酸氢钠溶液进行反应，即可。可以看出，在多黏菌素E甲磺 酸钠的制备过程中可能引入的杂质有：未反应完全的硫酸多黏菌素E原料，及 由该原料引入的硫酸根和过量的反应物甲醛和亚硫酸氢钠。因此，要想得到纯 度较高的目的产物，必须最大程度地去除这些杂质，这样才能得到高活性的多 黏菌素E甲磺酸钠。关于多黏菌素E甲磺酸钠分离纯化工艺的研究报道比较少 见。Kotula等报道了采用阴离子交换层析法去除多黏菌素E甲磺酸钠中多余的 钠离子(参见Purification of polymyxin E methanesulfonate.Pol.PL78942 15 Dec 1977，2 pp.(Polish).(Poland))。该方法需要使用两种层析介质， 生产过程相对麻烦，而且需要使用大量的酸碱处理层析介质，不但增加了成本， 对环境也是一种负担。因此，有必要发明一种低污染、低能耗，工艺简单、重 现性好，且制得的产品的纯度和活性较好的多黏菌素E甲磺酸钠分离纯化方法。

发明内容

本发明提供一种将多黏菌素E甲磺酸钠从含有小分子量杂质的混合物中分 离纯化的方法，所述的分离纯化方法包括通过超滤膜分离技术进行分离纯化， 使用的超滤膜的截流分子量一般在1000～10000之间，优选截流分子量在2000～ 6000之间的超滤膜。

其中超滤膜可以是有机材料膜，如有机纤维素膜、聚砜膜等，也可以是各 种无机材料膜，如陶瓷膜、黏土膜和金属膜等，优选使用有机材料膜，更优选 有机纤维素膜或聚砜膜。

其中所述的小分子量杂质，是指分子量小于600的分子、离子。可以是无 机小分子量杂质，如硫酸根离子、硫酸氢根离子、亚硫酸氢根离子、亚硫酸根 离子、钠离子；也可以是有机小分子量杂质，如甲醛等。

本发明的超滤膜分离中所使用的溶剂可以是水或其他有机溶剂，优选水。

本发明的分离纯化方法还包括：在使用超滤膜分离之后，采用低温冷冻干 燥法或者喷雾干燥法来干燥产品，以除去所使用的溶剂。

本发明的多黏菌素E甲磺酸钠的分离纯化方法，具有低污染、低能耗，工 艺简单、重现性好的特点，用该方法得到的多黏菌素E甲磺酸钠的纯度和生物 活性较好，均优于现有的层析分离方法得到的产品。

本发明的分离纯化方法可以用于从仅含有小分子量杂质的反应体系中分离 纯化多黏菌素E甲磺酸钠，也可以用于从受到小分子量杂质污染的多黏菌素E 甲磺酸钠中分离纯化多黏菌素E甲磺酸钠。