[发明专利]一种适用于地西泮残留分析的酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于地西泮(DZP)残留分析的酶联免疫检测试剂盒，属于酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒技术领域。

背景技术

地西泮(Diazepam)为苯二氮卓类镇静安眠药，化学名称为：1-甲基-5-苯基-7-氯-1，3-二氢-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮。曾用作动物饲料添加剂，作为生长促进剂，具有使动物嗜睡少动，生长快且有改变肉质的作用。也用在屠宰和动物检疫之前，或将动物转移屠宰之前，起镇静作用，以减轻动物紧张状态，降低动物伤害和死亡率。此类药物常见嗜睡，可见无力、头痛、晕眩、恶心、便秘，偶见皮疹、肝损害、骨髓抑制等不良反应。若随意在饲料中添加此类药物，蓄积的药物通过食物链进入人体，将造成巨大的危害。为此许多国家将此类药物列入禁用药物名单。目前，国内外有关地西泮的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、薄层色谱法(TLC)、气-质联用法(GC-MS)、液-质联用法(LC-MS)等，但这些方法不仅需要昂贵的仪器设备，对检材的要求也比较高，需要进一步的提纯处理才能进行，这已经不能达到现代检测对快速、方便、准确的要求。近年来，国外已经开展了对苯二氮卓类免疫分析方法的研究，但国内在这方面的研究起步较晚，大部分的检测产品还需要依赖国外进口。为了加强对国内肉制品的监督力度和保障人民的身体健康，有必要展开对苯二氮卓类免疫分析方法的研究，有必要建立一种快速有效的地西泮的酶联免疫吸附检测方法。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的在于提供一种具有高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度、操作方法简单的酶联免疫吸附检测试剂盒，用于地西泮残留的批量、快速检测。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供了一种地西泮残留分析的酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒包括包被了地西泮包被抗原的酶标板、海绵支架、地西泮标准品、地西泮多克隆抗体、酶标二抗、浓缩洗涤液、显色液和反应终止液。

其中，包被了地西泮包被抗原的酶标板的制备过程中，所用的包被原是地西泮的半抗原3-半琥珀酸酯地西泮与卵清蛋白(OVA)的偶联复合物，所用包被液是0.05 M pH 9.6碳酸钠缓冲液，所用封闭液是含2％OVA的上述包被液。

其中，地西泮多克隆抗体是用3-半琥珀酸酯地西泮与牛血清白蛋白(BSA)的偶联复合物常规方法免疫制备。

其中，酶标二抗是辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体。

其中，浓缩洗涤液(PBST)的配方为20mL蒸馏水中加入8g氯化钠，0.2g磷酸二氢钾，3g磷酸氢二钠，0.4g氯化钾，0.5mL吐温-20，浓缩洗涤液的浓度是正常使用时的50倍。

其中，显色液包括A液和B液，A液配方为每100mL水中加入0.933g柠檬酸，3.68g Na₂HPO₄·12H₂O和18μL30％H₂O₂；B液配方为60mg四甲基联苯胺溶于100mL乙二醇，使用时按A∶B＝5∶1的比例使用。

本发明试剂盒的检测分析原理是：酶标板上的每个孔均包被有相同量的地西泮抗原，加入待测地西泮样品和地西泮多克隆抗体后，固相包被抗原和待测地西泮相互竞争与多克隆抗体反应，由于每个孔中的固相抗原和加入的多克隆抗体含量均一致，所以当待测样品的地西泮浓度高时，则被结合在固相抗原上的多克隆抗体少，加入的酶标二抗与被固定抗体结合量少，用洗涤液洗涤后加入底物液(即显色液A液)和显色液(即B液)，显色反应浅，用酶标仪检测的吸光值低，表明抑制率高；反之，当待测样品的地西泮浓度低时，则所测的吸光值高，抑制率低。根据用已知的地西泮浓度检测所作的标准曲线，可以推算出待测样品的地西泮的浓度。

(三)有益效果

本发明提供的地西泮残留检测试剂盒采用了地西泮多克隆抗体，能准确灵敏地检测尿液、组织中地西泮及其他结构相似的苯二氮卓类残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法，而且本发明试剂保存时间长，无放射性污染。本发明对解决大批量样品的地西泮残留现场监控技术具有重要的现实意义。

附图说明

图1地西泮的标准抑制曲线。

具体实施方式

以下是实施例用于对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明所要保护的范围。

实施例1试剂盒操作及结果计算：