[发明专利]家猪增殖诱导配体cDNA序列及其克隆方法和重组应用

权利要求书

1.家猪增殖诱导配体cDNA，其特征在于，它的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的家猪增殖诱导配体cDNA的克隆方法，其特征在于步骤如下：

(1)根据已知的增殖诱导配体cDNA保守序列设计引物：

正义寡核苷酸兼并引物z1：5’-CAGAGNNCNGATGNCCTGGAAGCCTG-3’，反义寡核苷酸兼并引物z2：5’-TCACAAACCCCAGGAANGTTCCATG-3’，其中N为A、T、G或C；

(2)从家猪脾脏提取总RNA，

(3)通过RT-PCR方法，以上述引物z1及z2为特异性引物，扩增出一段cDNA序列，命名为P1，克隆入pMD18-T载体，并对其碱基序列进行测定，

(4)应用cDNA末端快速扩增方法，根据已获得的P1核苷酸序列设计正义引物GSP25’-GTCTCCTGCCTTCCCTGGCCCTCCCGAG-3’及反义引物GSP1 5’-CAAGCGTGGGAGAGGTCTGGAGGCCCAAG-3’分别用以扩增出家猪增殖诱导配体cDNA 3’-及5’-全长末端区域，扩增片段分别命名为P2及P3，然后分别克隆入pMD18-T载体，对其碱基序列进行测定，

(5)根据P1、P2、P3的重叠区域拼接出cDNA的全长序列，并设计首尾引物FL15’-GCTTCCTAGAGAAACTGACACTAAATTCTC-3’及FL2 5’-CTGTCAAACCTGGGGTTCCAGTCAAAC-3’一步扩增出全长cDNA序列，克隆入pMD18-T载体，挑取阳性克隆进行碱基序列测定及验证。

3.家猪增殖诱导配体，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.2所示。