[发明专利]利用内含肽反式剪接制作蛋白质分子量标准的方法

权利要求书

1、利用内含肽反式剪接制作蛋白质分子量标准的方法，其特征是选择一段一定分子量的已知蛋白X，另选择两种互不兼容的内含肽A和B，将内含肽A和B分别分解为氨基末端(N端)与羧基末端(C端)，即An、Ac、Bn、Bc；然后将它们组成五个重组蛋白，即起点蛋白(X-An)、中段1(Ac-X-Bn)蛋白、中段2蛋白(Bc-X-An)、终点1蛋白(Ac-X)、终点2蛋白(Bc-X)；通过上面五个蛋白的相互组合连接叠加，获得多种分子量分布范围的蛋白质分子量标准。

2、根据权利要求1所述的利用内含肽反式剪接制作蛋白质分子量标准的方法，其特征是五种非天然形成的蛋白分子构成：

1)一种蛋白包含一定分子量的已知蛋白和断裂内含肽A的氨基末端部分；

2)一种蛋白包含断裂内含肽A的羧基末端部分，一定分子量的已知蛋白和断裂内含肽B的氨基末端部分；

3)一种蛋白包含断裂内含肽B的羧基末端部分，一定分子量的已知蛋白和断裂内含肽A的氨基末端部分；

4)一种蛋白包含断裂内含肽A的羧基末端部分和一定分子量的已知蛋白；

5)一种蛋白包含断裂内含肽B的羧基末端部分和一定分子量的已知蛋白。

3、根据权利要求1所述的利用内含肽反式剪接制作蛋白质分子量标准的方法，其特征是：

1)编码“起点”蛋白的核苷酸序列，该核酸分子的由已知蛋白的核苷酸序列的3′端侧接编码断裂内含肽A的氨基末端部分的核苷酸序列；

2)编码“中段1”蛋白的核苷酸序列，该核酸分子由已知蛋白的核苷酸序列的5′端侧接编码断裂内含肽A的羧基末端部分的核苷酸序列，3′端侧接编码断裂内含肽B的氨基末端部分的核苷酸序列；

3)编码“中段2”蛋白的核苷酸序列，该核酸分子由已知蛋白的核苷酸序列的5′端侧接编码断裂内含肽B的羧基末端部分的核苷酸序列，3′端侧接编码断裂内含肽A的氨基末端部分的核苷酸序列；

4)编码“终点1”蛋白的核苷酸序列，该核酸分子的由已知蛋白的核苷酸序列的5′端侧接编码断裂内含肽B的羧基末端部分的核苷酸序列；

5)编码“终点2”蛋白的核苷酸序列，该核酸分子的由已知蛋白的核苷酸序列的5′端侧接编码断裂内含肽A的羧基末端部分的核苷酸序列。

4、根据权利要求1所述的利用内含肽反式剪接制作蛋白质分子量标准的方法，其特征是选择大肠杆菌Escherichia coli K12的gusA基因的1-85氨基酸，加上一个天冬氨酸(密码子为GAU)，得到分子量为10000.23Da的蛋白序列，作为蛋白X；另选择蓝藻Synechocystis sp.PCC6803的DnaE和DnaB分别作为内含肽A和B。将内含肽A和B分别分解为氨基末端(N端)与羧基末端(C端)，即An、Ac、Bn、Bc。然后将它们组成五个重组蛋白，即起点(X-An)、中段1(Ac-X-Bn)、中段2(Bc-X-An)、终点1(Ac-X)、终点2(Bc-X)；

首先让“起点”蛋白和“终点2”蛋白反应，得到分子量为已知蛋白两倍的蛋白；

让“起点”蛋白、“中段2”蛋白反应，然后再加入“终点1”蛋白反应，得到分子量为已知蛋白3倍的蛋白；让“起点”蛋白、“中段1”蛋白反应，然后再加入“中段2”蛋白反应，最后加入“终点2”蛋白，得到分子量为已知蛋白4倍的蛋白；依次循环重复，便可以得到分子量为已知蛋白任意整数倍的蛋白。