[发明专利]一种固定化米糠谷氨酸脱羧酶富集γ-氨基丁酸的制备方法无效

专利信息
申请号: 200810025136.2 申请日: 2008-04-24
公开(公告)号: CN101265487A 公开(公告)日: 2008-09-17
发明(设计)人: 张晖;郭晓娜;王立;马晓博;姚惠源 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12P13/00 分类号: C12P13/00;C12N11/04
代理公司: 无锡市大为专利商标事务所 代理人: 时旭丹;刘品超
地址: 214122江苏省无锡*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 固定 米糠 谷氨酸 脱羧酶 富集 氨基 丁酸 制备 方法
【说明书】:

技术领域

一种固定化米糠谷氨酸脱羧酶富集γ-氨基丁酸(GABA)的制备方法,属于米糠精深加工技术领域。

背景技术

稻谷是地球上主要的粮食作物之一,中国素来以“稻米王国”著称,稻谷年产量占世界稻谷总产量的35%左右,居世界首位。米糠作为稻谷的副产品,来源十分丰富,如很好利用,可实现很高的附加值。米糠中谷氨酸脱羧酶酶活性很高,可以用来作催化剂,催化味精发生脱羧反应生成GABA。而我国的米糠资源绝大部分以传统的饲料形式消费掉,十分浪费。

日本现已有高GABA含量的各种食品在市场中销售,例如发芽糙米、GABA茶、GABA护肤品、保健品等,并且市场很好,而我国还没有此类商品上市,急待我国生产厂商补充国内空白。

发明内容

本发明的目的是提供固定化米糠谷氨酸脱羧酶富集GABA的制备方法,利用健康无毒的海藻酸钠固定化米糠谷氨酸脱羧酶,所得产品较常规的直接用米糠富集GABA所得产品的蛋白质和糖含量大幅下降,仅为后者的1/10,实现GABA的富集与分离的同步进行,省去了GABA的分离成本。并且由于产品杂质含量大为减少,应用的范围更广。

本发明的技术方案:一种固定化米糠谷氨酸脱羧酶富集γ-氨基丁酸的制备方法,先将米糠粉碎、过筛,与一定浓度的海藻酸钠溶液混合并搅拌均匀,装入制球设备并逐滴滴入CaCl2溶液中成球,硬化球体,清洗多余CaCl2和未被固定化的米糠,得固定化米糠谷氨酸脱羧酶;将此酶与PBS缓冲溶液混合,并加入0.05mol/L的谷氨酸钠作为底物,45℃摇床反应得γ-氨基丁酸富集液,烘干即得产品;

(1)米糠粉碎、过筛:先将米糠进行粉碎,要求过60目筛网,以防止较大颗粒堵住制球设备的孔眼。原料米糠要新鲜制备,防止陈旧米糠的谷氨酸脱羧酶酶活力太低。

(2)过筛后米糠与海藻酸钠溶液混合:先配制质量浓度为2%的海藻酸钠溶液,海藻酸钠溶解完全后加入过筛米糠,使过筛米糠质量浓度控制6%,搅拌均匀,得混合液。

由于海藻酸钠溶解性较差,可在溶液温度低于45℃的条件下加热搅拌以促进溶解,当溶解完毕后应立即或尽快使用,因海藻酸钠溶液较长时间放置后易失去原有的粘稠度,直至不能包裹固定住米糠。米糠和海藻酸钠溶液应充分混匀再制球,混合越充分,包裹效果越好。

(3)制球:配制质量浓度为1%-1.5%的CaCl2溶液,保持溶液搅拌流动;将上步骤(2)的混合液装进制球设备,保持1滴/s的滴出速度,在距液面10cm处滴入CaCl2溶液中,立即成球。

保持CaCl2溶液搅拌流动速度适当,以落入溶液中的球体不相粘连为宜,过快易使球体破裂;制球设备的滴出速度保持1滴/s,过快或过慢所成球体均不圆。

液滴保持距液面10cm处滴入CaCl2溶液中,立即成球,过高或过低亦影响球体形状和固定化效果。

(4)硬化:保持CaCl2溶液流动,以使其中的球体悬浮,不需过快或过慢,1h后倾去CaCl2溶液,时间长会降低酶活,1h后倾去CaCl2溶液。严格控制CaCl2溶液浓度,CaCl2严重影响固定化米糠谷氨酸脱羧酶的酶活,低浓度时球体易破裂,物理机械性不够好,高浓度会强烈抑制酶活。

(5)清洗:以等于CaCl2溶液体积的去离子水替换CaCl2溶液,保持搅拌,清洗球体,共换三次水,每次搅拌20min;清洗的目的是除去未固定化的米糠,所述的清洗时间和次数已足够,不需额外再加。

清洗时需时刻保持球体悬浮,才能洗净多余的CaCl2,以防抑制酶活。

(6)润洗:将去离子水换为PBS缓冲溶液,保持搅拌,润洗球体,共换两次PBS缓冲溶液,每次搅拌20min,得固定化谷氨酸脱羧酶;润洗操作即是清洗的继续,又是为反应做准备。此操作需保持球体时刻悬浮。

(7)反应:以固定化谷氨酸脱羧酶∶PBS缓冲溶液质量比控制为3∶4的比例于保温容器中,按0.01-0.05mol/L的浓度加入谷氨酸钠,保持搅拌反应,温度45℃,反应10-13h小时后,得反应液;

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学,未经江南大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200810025136.2/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code