[发明专利]链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的制备方法有效
| 申请号： | 200810025624.3 | 申请日： | 2008-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN101475949A | 公开（公告）日： | 2009-07-08 |
| 发明（设计）人： | 赵开弘;周明;夏坤;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司;华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/70;C12N15/65;C07K14/405 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘 媖 |
| 地址： | 510663广东省广州市科学*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 亲和 标记 结合 藻红胆素 蛋白 alpha 亚基类 荧光 蛋白质 制备 方法 | ||
1.一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
(1)用基因工程方法，将alpha亚基裂合酶基因：Anabaena sp.PCC7120中cpcE和cpcF基因或M.laminosus sp.PCC7603中cpcE和cpcF基因克隆于表达载体中，得到alpha亚基裂合酶表达质粒；
(2)用基因工程方法，将链霉亲和素基因：GeneBank中编号为AF283893的基因和藻蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白基因：Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcA基因克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；
(3)用基因工程方法，将来自Calothrix sp.PCC7601的pebA和pebB藻红胆素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第三个表达载体中，得到hol和pebB表达质粒；
(4)用基因工程方法，将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于第四个表达载体中，得到pebA表达质粒；
(5)将alpha亚基裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、hol和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入同一个宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌。
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