[发明专利]一种温敏含糖嵌段聚合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种温敏含糖嵌段聚合物，其特征在于：所述温敏含糖嵌段聚合物分子结构如下：

其中，聚(N-异丙基丙烯酰胺)即PNIPAAm链段的数均分子量在10000～30000之间。

2.权利要求1所述的温敏含糖嵌段聚合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)酮式麦芽七糖的制备：搅拌下将碘的甲醇溶液滴加到麦芽七糖水溶液中，所述麦芽七糖水溶液的浓度在0.4～0.5g/ml之间，麦芽七糖和碘的物质的量比为1∶2～3，碘的甲醇溶液与麦芽七糖水溶液的体积比为1∶0.25～0.27；然后将所得混合液升温到40～45℃，并继续滴加氢氧化钾的甲醇溶液，所加入氢氧化钾的甲醇溶液是碘的甲醇溶液体积的2倍，其中氢氧化钾的物质的量是碘的物质的量的2～3倍，滴加完毕后继续保温反应至碘的颜色消失；然后将所得反应混合物在冰-水浴中冷却后至晶体析出，经过滤、甲醇和乙醇依次洗涤、真空干燥后得到晶体；将所得晶体溶解在水中，经活性碳脱色、填充有酸性离子交换树脂的色谱柱分离后，所得水溶液蒸去溶剂水后经冷冻干燥得到酮式麦芽七糖；

(2)胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)的制备：将物质的量比为1∶x∶0.005的N-异丙基丙烯酰胺、二氨基乙硫醇盐酸盐、偶氮二异丁腈溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，所述x的值在0.01～0.025之间；通氮气30～35min后，升温到70～75℃并在氮气保护下搅拌反应7～8h；反应完毕冷却到室温后，先加入KOH除去二氨基乙硫醇盐酸盐上的HCl，然后倒入18～20倍于其体积的乙醚中形成沉淀；所得沉淀再用四氢呋喃/乙醚重新溶解/沉淀一次，沉淀干燥后即得产物胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)；

(3)温敏含糖嵌段聚合物的制备：将步骤(2)得到的胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)和步骤(1)得到的酮式麦芽七糖溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，然后在75～85℃下搅拌反应20～24h，所述每ml N，N-二甲基甲酰胺中溶有0.08～0.015g胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)，所述酮式麦芽七糖的物质的量是胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)物质的量的4～6倍；反应完毕后，在搅拌下将乙醚加入到反应混合液中产生沉淀，过滤得到沉淀并干燥，所述乙醚体积是N，N-二甲基甲酰胺体积的8倍；将干燥后的沉淀用四氢呋喃溶解，所述四氢呋喃与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1.5～2∶1；过滤除去不溶物，得到四氢呋喃溶液；在搅拌下将乙醚滴加到上述四氢呋喃溶液中进行沉淀；过滤，沉淀减压干燥后即得温敏含糖嵌段聚合物。

3.根据权利要求2所述的温敏含糖嵌段聚合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中产物胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)的数均分子量在10000～30000之间。

4.根据权利要求2所述的温敏含糖嵌段聚合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中四氢呋喃/乙醚中四氢呋喃∶乙醚的体积比1∶20。

5.根据权利要求2所述的温敏含糖嵌段聚合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在搅拌下将乙醚滴加到上述四氢呋喃溶液中进行分级沉淀，所述乙醚与四氢呋喃溶液体积比为2.5∶1。

6.权利要求1所述的温敏含糖嵌段聚合物在辅助溶菌酶复性中的应用。

7.根据权利要求6所述的温敏含糖嵌段聚合物在辅助溶菌酶复性中的应用，其特征在于：所述的温敏含糖嵌段聚合物在辅助溶菌酶复性中的应用，是按下述方法进行：在15～20℃下，将制备的温敏含糖嵌段聚合物溶解在复性缓冲液中，然后用该复性缓冲液稀释鸡蛋清溶菌酶变性液，混合均匀后在20～30℃的温度下复性24h；所述复性缓冲液与鸡蛋清溶菌酶变性液体积比为4∶1；

所述复性缓冲液的组成：含0.5mol/L尿素、1mmol/L EDTA、1.25mmol/L氧化型谷胱甘肽、5mmol/L还原型谷胱甘肽的pH8.2、0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，其中温敏含糖嵌段聚合物的浓度为2.5mg/ml；

所述鸡蛋清溶菌酶变性液的制备：将天然鸡蛋清溶菌酶溶解于含8mol/L尿素、1mmol/L EDTA、30mmol/L二硫苏糖醇的pH 8.6、0.1mol/L Tris-HCl变性缓冲液中，得到5mg/ml的溶菌酶溶液后，在37℃下保温3h，经酶活检测完全丧失活性。