[发明专利]一种烟草及其制品氨基酸的质谱分析方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析检测技术领域，具体涉及一种烟草及其制品氨基酸的质谱分析方法。 

背景技术

氨基酸是烟叶中的重要组成部分，是与烟气香味、卷烟品质和品牌特征密切相关的烟草成分，氨基酸参与烟叶中的非酶棕色反应，即美拉德反应，此反应可产生多种重要的致香成分。因此，测定烟草中的氨基酸对配方研制、工艺生产和品质控制都有十分重要的意义。 

烟草成分相当复杂，用LC、自动氨基酸分析仪、离子色谱(IC)和毛细管电泳(CE)等方法进行氨基酸分析往往需要对样品进行固相萃取等繁杂的前处理，以减少干扰。现有的固相萃取等前处理会在一定程度上造成某些氨基酸(或氨基酸衍生物)的损失，而且有些干扰杂质也难以通过前处理消除。LC和IC等色谱方法主要通过保留时间来识别化合物，因此必须花费较多时间摸索色谱分离条件以及准确判定待测物，而且色谱方法都难以解决化合物共流出的问题，致使某些待测化合物和干扰物不能区分。 

近年来，随着电喷雾离子化(ESI)和串联质谱(MS/MS)技术的发展，液相色谱和电喷雾串联质谱联用(LC-ESI-MS/MS)在复杂化合物分析中得到广泛的应用。但目前尚未见液相色谱和电喷雾串联质谱联用技术在烟草样品氨基酸分析中应用的相关报道。 

液相色谱和电喷雾串联质谱联用，质谱分析烟草氨基酸，质谱的条件的恰当设置对氨基酸的准确及高灵敏度检测十分重要，不同的分段(Segment)可调用独立的调谐文件，适当的扫描范围有利于降低背景噪音及杂质干扰，关系到检测的灵敏度。 

目前没有见到对烟草氨基酸质谱分析条件进行系统的优化设置的报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种烟草及其制品氨基酸的质谱分析方法。 

本发明的目的通过以下技术方案来予以实现： 

提供一种烟草及其制品氨基酸的质谱分析方法，待测样品提取液经色谱分离后进行质谱分析，所述质谱分析是制作两种不同浓度系列的标准曲线，使用电喷雾离子阱串联质谱在正离子模式下对烟草中游离氨基酸进行分析检测。 

所述质谱分析条件是氮气压力：0.64MPa；氦气压力：0.38MPa；极性：正电离；扫描形式：全扫描；采集时间：40min；激活时间：30ms；吹扫气：0LTQ单位；喷雾电压：5kV；毛细管温度：350℃；扫描范围：标准；扫描速率：标准；分段。所述分段是分为4段，其中第3分段的鞘气和辅助气分别为38LTQ单位和0LTQ单位，其余分段的鞘气和辅助气分别为46LTQ单位和19LTQ单位。其他参数由自动调谐确定或依照LTQ质谱的默认设置。 

本发明的有益效果是提供了质谱分析条件的恰当设置，对分段以及各氨基酸的扫描范围进行了优化设置，有效保证对氨基酸检测的准确度及高灵敏度。

附图说明

图1 20种氨基酸和内标正缬氨酸的提取离子流图 

图2 加标前Ile和Leu提取离子流图 

图3 加标后Ile和Leu提取离子流图 

图4 加标前Val和Nva提取离子流图 

图5 加标后Val和Nva提取离子流图 

图6～26 氨基酸的二级质谱图 

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例来进一步详细说明本发明。 

实施例1 

本实施例在进行烟草及其制品的氨基酸分析检测中，采用液相色谱分析-电喷雾串联质谱分析的方法，在实验的过程中对质谱分析条件进行了优化，同时配合对液相色谱分析条件的恰当设置，获得了准确和高灵敏度的实验结果。 

1、仪器、材料与试剂 

美国热电公司LC-MS LTQ液相色谱-离子阱质谱仪，配备自动进样器、四元梯度质谱泵，LTQ离子阱质谱带电喷雾电离源(ESI)，Xcalibur 1.4 SR1系统控制软件；意大利Claind N2LCMS氮气发生器；法国Millipore Element A10纯水机；美国Cole-Parmer 8892超声清洗器；Sartorious CP225D电子天平(Max 220g，d＝0.01mg(80g)，0.1mg(220g))；Whatman 0.2μm尼龙针式滤头；磨样机磨出的烟草粉末。