[发明专利]一种共表达人源谷氨酸脱羧酶和细胞因子的重组病毒

说明书

技术领域

本发明涉及一种共表达谷氨酸脱羧酶和细胞因子的重组病毒、尤其是 重组腺相关病毒的构建及其制备方法，其所在的技术领域与生命科学和生 物医药技术有关。

背景技术

研究证明哺乳类脑纹状体及纹状体投射区域的大多数神经元的神经 递质为γ-氨基丁酸(GABA，下同)，GABA为哺乳类脑组织的主要抑制性神 经递质，而谷氨酸脱羧酶(GAD，下同)是合成GABA限速酶，GAD有GAD 65 和GAD 67两种同功酶(Lindefors N.et al：Prog.Neuropsycho.pharmacol.Biol Psychiatry.1993；17(6)：887-903)。有研究人员应用表达GAD65基 因的腺相关病毒(AAV，下同)对动物模型帕金森氏病进行治疗性研究，结 果显示帕金森氏症状有明显改善，电生理研究也证明增加GAD65在下丘核 神经元的表达，可使下丘核神经元从兴奋性输出状态改变为抑制性输出状 态(Lee B，et al：Gene Ther.2005 Aug；12(15)：1215-22；Emborg ME，et al： J Cereb Blood Flow Metab.2007 Mar；27(3)：501-9.)，这些研究为GAD治疗人帕金 森氏病打下了坚实的基础。

新近报导，经批准，美国在12名晚期帕金森氏病患者应用表达GAD65 基因的AAV对帕金森氏病进行了临床I期研究，结果表明帕金森氏症状有 显著改善，耐受良好、安全、有效(Kaplitt MG，et al：Lancet.2007 Jun 23；369(9579)：2056-8)。国内研究人员应用对人体无致病性的泡疹病毒作 为表达载体在星状细胞进行表达GAD研究，但尚未在动物或人体对帕金森 氏病进行治疗研究(Liu W，et al：Intervirology.2005 Sep-Oct；48(5)：329-35；Liu W et al：Mol Ther.2007)。

此外，已经研究证明GABA合成酶GAD与惊厥、癫痫和小脑性共济失 调症的发生有关。缺失GAD65的小鼠发生自发性癫痫，回交产生的GAD65 缺失的小鼠癫痫发作易感性显著增加(Kash SF，et al：Proc Natl Acad SciUSA.1997 Dec 9；94(25)：14060-5))；而在癫痫动物模型脑相关部位移 植表达GABA合成酶GAD的细胞可减少或阻断癫痫的发生(Gernert M，et al： Exp Neurol.2002 Jul；176(1)：183-92；W，et al：J NeurosciRes.1998 Jan 15；51(2)：196-209；Vulliemoz S，et al：J NeurolNeurosurg Psychiatry)。

毫无疑问，上述临床研究证实了GAD作为哺乳类脑神经细胞的主要 抑制性神经递质GABA的合成限速酶用于治疗帕金森氏病是安全、有效的。 不过，显然，这种治疗是一种改善帕金森氏病症状性的冶疗，并不能改变 帕金森氏的病理进程以及由此产生的其他临床症状。