[发明专利]一种猪免疫性状相关基因TAP1及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种猪免疫性状相关基因TAP1及其制备方法，以及其突变位点检测方法和在建立适用于猪免疫性状的分子标记方面的应用。

背景技术

近10年以来，现代育种技术使猪的生产性能(生长，胴体与肉质性状)得到了显著的改良，而对猪健康及抵抗疾病能力的遗传改良却重视不够。

随着分子遗传学的飞速发展，畜禽遗传图谱的不断完善，遗传标记的不断补充，使一些与疾病抗性有关的基因或遗传标记相继被发现。采用遗传学方法从遗传本质上提高畜禽的抗性，减少疾病的发生，对于控制疾病，提高养猪效益和安全养殖具有标本兼治的重要意义。

个体免疫力是衡量动物健康的重要指标(Knapp等，2000)，它属于数量性状，其中涉及相关基因较多，分子机制很复杂。免疫力与生产性能通常表现为表型负相关关系，这为育种工作者提出了一个大的难题，即如何在保持和提高生产性能的基础上同时提高个体免疫能力是育种工作者研究的新课题。最近国外少量研究表明猪免疫能力与生产性能的关系是双向的，某种情况下即正常状态免疫能力的增强能提高猪的生长速度，饲料效率等主要生产性能，而单纯针对生产性能的选择却导致猪免疫能力下降即相关等位基因的丢失或频率的降低。但是，目前二者的相互关系仍然不是很明了，从基因组水平揭示出生产性能和免疫力的控制基因体系间的具体关系，是解决上述难题的有效途径。

在抗病育种中，抗病基因的寻找是关键。肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)是引起仔猪泻痢的主要病原体之一(施启顺，2001)，研究表明动物体内如果缺乏大肠杆菌K88受体或F18受体，就会对相应的血清型大肠杆菌引起的腹泻产生抗性，目前编码大肠杆菌K88受体(K88abR和K88acR)的基因已经定位在猪13号染色体上靠近转铁蛋白基因的位置(Edfors-Lilja等，1997)，α-(1，2)-海藻糖转移酶1(α(1，2)fucosyltransferase，FUT1)基因是F18受体(ECF18R)的候选基因，位于猪6号染色体上(Meijerink等，1997)。

此外，猪第7号染色体着丝粒附近的主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex，MHC)基因已经被证明与抗体对多种抗原的应答、细菌的噬菌作用、对螺旋旋毛虫和恶性黑素瘤的易感性等性状有相关(Peelman等，1996)，其它与抗病力有关的基因还有MX1(Myxovirus(influenza)resistance 1，粘液病毒(流感)抗性因子1)、NRAMP1(Natural resistance-associated macrophageprotein 1，与巨噬细胞有关的天然抗性蛋白1)，IL1(Interleukins 1，白细胞介素1)、PPARG(Peroxisome proliferator activated receptor gamma，过氧化物酶体增殖激活受体γ)等基因。

Rothschild实验室长期从事MHC基因单倍型与猪初生重、断奶重、生长速度、背膘厚等性状有关等性状的研究，他们认为MHC基因单倍型与上述生产性能存在相关关系(Rothschild MF，1998)。

内源性抗原通过MHC类分子提呈给细胞毒性T细胞(CTL)是机体细胞免疫识别的重要阶段。抗原处理相关转运体(transporterassociated with antigen processing，TAP)负责抗原肽从胞浆到内质网的转运，在MHC类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用，TAP结构和功能障碍将导致细胞表面MHC类分子表达缺陷，这成为肿瘤细胞、病毒感染细胞逃逸免疫监视的重要机制。

人的TAP基因是于1985年首次发现的，TAP是由TAP1与TAP2亚单位以异二聚体的形式发挥生物学效应，在MHC-I类分子介导的抗原递呈途径中起着重要作用(Colonna et al.，1992)。因此，TAP的异常将严重影响抗原递呈，成为病毒感染及肿瘤细胞逃避免疫监视的重要机制，如卵巢癌、肝癌及宫颈癌(Vermeulen et al.，2007)。