[发明专利]实时荧光定量PCR检测柯萨奇病毒A16型的试剂盒

权利要求书

1.一种检测样品中柯萨奇病毒A16型存在的试剂盒，该试剂盒包括：(1)分别装有RNA 提取液、PCR扩增反应液、阴性质控品、阳性质控品和定量参考品并加盖密封的多个试剂瓶 或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中PCR扩增反应液由耐热DNA聚合 酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、脱氧核糖核苷三磷酸、正向引物、反向引物，两末端分别结合 有荧光发生基团和荧光淬灭基团的寡核苷酸探针组成，其特征在于PCR扩增反应液中用于靶多 核苷酸扩增的正向和反向引物的序列分别为：

正向引物CA16-F1：5’-CAT GCA GCG CTT GTG CTT-3’

        CA16-F2：5’-CAT GCA ACG ACT GTG CTT TC-3’

反向引物CA16-R1：5’-CAC ACA ATT CCC CCG TCT TAC T-3’

        CA16-R2：5’-CAT AAT TCG CCC GTT TTG CT-3’

PCR扩增反应液中所使用的寡核苷酸探针的序列为：CA16-P1 5’-CGC TTG TGC TTT CCA GTG TCG GTG-3’和CA16-P2 5’-CGA CTA TGC TTC CCT GTC TCG GTG CA-3’。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中正向引物浓度为 0.42μmol/L、反向引物浓度为0.42μmol/L、寡核苷酸探针浓度为0.21μmol/L。

3.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中的耐热DNA聚合酶的浓度为 5U/反应。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中的逆转录酶的浓度为100U/ 反应。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中RNA酶抑制剂的浓度为20U/ 反应。

6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中镁离子浓度为2.15mmol/L。

7.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应液中脱氧核糖核苷三磷酸的浓度 为0.20mmol/L。

8.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于用于PCR扩增的反应温度和时间为：40℃逆 转录30min；然后94℃预变性3min；最后93℃ 15s，55℃ 45s，40个循环。

9.根据权利要求1中试剂盒，其特征还在于所检测的样品选自粪便、血清、咽拭子、脑 脊液、疱疹液样品。