[发明专利]内毒素吸附剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种内毒素吸附剂及制备方法，特别是一种用于血液灌流的内毒素吸附剂及其制备方法。

背景技术

内毒素是革兰氏阴性菌生长时释放或死亡时由细胞壁裂解产生的一类脂多糖类物质，极微量(纳克级)内毒素进入人体就会引起高热，血管扩张，甚至昏厥或死亡。内毒素血症是临床最常见的致死疾病之一，死亡率可达40％-90％。

临床上尚无有效治疗内毒素血症的方法，已有的方法之一是通过键合有多粘菌素(PMB)的吸附剂进行血液灌流。其中多粘菌素是一种环状十肽，为环状结构的7肽和3肽的N端，含有疏脂性和亲脂性基团及一个多肽尾。多粘菌素为一种离子表面除垢剂，能破坏革兰氏阴性菌外层或细胞质膜的通透性。血液灌流疗法是依靠吸附剂直接吸附除去血液中的有毒成份或致病物质，达到净化血液、缓解和治疗疾病的目的。

ZL03144231.5号中国发明专利公开一种内毒素吸附剂及其制备方法，通过以琼脂为原料，采取向甲苯-四氯化碳混合液中加琼脂水溶液的方法，得到球状琼脂，经碱性条件下环氧氯丙烷活化后与二胺反应，产物经与戊二醛反应，产生部分交联，得到强度较好的珠状琼脂作为吸附剂载体。载体与多粘菌素B等含胺基的配基反应后，经硼氢化钠还原，即得到以琼脂凝胶为载体，固定有效量多粘菌素的内毒素吸附剂。该种内毒素吸附剂的多粘菌素B固载量为10.6-22.5毫克/克吸附剂，内毒素吸附量为0.5-1纳克/克吸附剂。

CN 200510046452.4号中国发明专利申请公开一种用于血液灌流的内毒素吸附剂的制备方法，通过生物相容性好的球形琼脂糖凝胶为基质，采用环氧氯丙烷、己二胺、1，1’-羰基二咪唑活化后，键合多粘菌素B配基后，经硼氢化钠还原，即得到内毒素吸附剂。通过该方法制备的吸附剂多粘菌素B固载量6.12毫克/克吸附剂，内毒素吸附量达22纳克/克吸附剂。

上述内毒素吸附剂的多粘菌素B固载量均较小，吸附效果不理想。此外，上述内毒素吸附剂在制备过程用环氧乙基活化基质与配体偶联时需要碱性条件，pH为9-13，温度为20-40℃。这样的条件对作为基质的琼脂糖凝胶强度破坏较大，使内毒素吸附剂在血液灌流过程容易产生微粒，给使用带来风险。

发明内容

本发明的目的之一是克服现有技术的缺陷，提供一种新的内毒素吸附剂。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：内毒素吸附剂，以球形多孔纤维素为载体，固载用于血液灌流的内毒素吸附剂中有效量的多粘菌素B为配基构成，其中，球形多孔纤维素的粒度为0.20-0.40毫米。

更好的方案是：每克内毒素吸附剂固载的多粘菌素B为30-40毫克。

球形多孔纤维素载体的强度较琼脂要好，使用更为安全。尤其是以粒度为0.20-0.40毫米的球形多孔纤维素为载体时，每克内毒素吸附剂固载的多粘菌素B可达30-40毫克，每克吸附剂可吸附内毒素80-120纳克。

本发明的目的之二是克服现有技术的缺陷，提供一种新的制备内毒素吸附剂的方法。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：内毒素吸附剂的制备方法，包括以下步骤：

A.过碘酸钠活化球形多孔纤维素

向含有球形多孔纤维素的悬浮液中，加入过碘酸钠溶液，使体系中过碘酸钠溶液的浓度在1.0-2.0克/升之间，控制温度15-25℃，反应1-3小时，升温至30-35℃，继续反应10-30分钟。

B.活化球形多孔纤维素固载多粘菌素B

向活化球形多孔纤维素中加入10-20克/升的多粘菌素B硼酸缓冲溶液，控制体系温度30-40℃，反应0.5-2小时。加入硼氢化钠溶液，使其浓度在0.8-1.5克/升，反应2-4小时，再加入硼氢化钠溶液，使其浓度在1.6-3.0克/升，降至室温，继续反应10-20小时。用5N浓度的盐酸调节体系pH值5.5-6，继续搅拌10-20分钟。

C.吸附剂无热源处理

在洁净环境中，向吸附剂中加入2倍体积的0.1-1N醇-钠溶液，浸泡1-4小时，用灭菌注射用水冲洗至中性。

球形多孔纤维素以过碘酸钠活化后键合多粘菌素B，然后用硼氢化钠还原的合成路线可以用如下反应式表示：

因为过碘酸盐氧化纤维素具有高度专一性，没有明显的副反应，能使纤维素链中葡萄糖环上的C2-C3键断开，使原来的羟基转化成具有高还原性的二醛基，利用多粘菌素B上氨基与醛基发生反应形成共价键结合，将多粘菌素B固载在纤维素上，然后用硼氢化钠将未反应的活化基团还原，可得到生物相容性良好的内毒素吸附剂。