[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的针层孔菌多糖Ⅱ及其提取分离方法有效
| 申请号： | 200810028951.4 | 申请日： | 2008-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN101323646A | 公开（公告）日： | 2008-12-17 |
| 发明（设计）人： | 陶美华;章卫民;郑爱珠;陈玉婵;潘清灵;李浩华;王磊 | 申请（专利权）人： | 广东省微生物研究所 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 | 代理人： | 莫瑶江 |
| 地址： | 510070广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 肿瘤 活性 针层孔菌 多糖 及其 提取 分离 方法 | ||
1.一种具有抗肿瘤活性的针层孔菌多糖II的提取分离方法，所述针层孔菌的GenBank登录号为EU787449，其特征在于：该方法包括如下步骤：
a、粗多糖的提取：取针层孔菌子实体，粉碎，加水煮沸提取，提取液浓缩后加入乙醇，置于4℃冰箱内，静置5-20小时，离心分离，沉淀在40-60℃干燥即得粗多糖；
b、针层孔菌多糖的分离：取粗多糖，溶于pH值为4～5的醋酸-醋酸钠缓冲液中，离心，离心液过滤，滤液上离子交换柱，用pH值为4～5的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱1～3个柱体积，该洗脱液弃去，然后再用pH值为4～5的含NaCl浓度≥0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱1～3个柱体积，洗脱液经透析除盐后浓缩，在40℃干燥，即得所述多糖II。
2.按照权利要求1所述针层孔菌多糖II的提取分离方法，其特征在于：所述步骤a为：取针层孔菌子实体，粉碎，加重量为其2～10倍量水煮沸提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液，浓缩后加入重量为其3～5倍量90％乙醇，置于4℃冰箱内，静置5-20小时，以3500～4500r/min的速度离心分离，沉淀在40-60℃低温干燥即得粗多糖。
3.按照权利要求1所述针层孔菌多糖II的提取分离方法，其特征在于：所述步骤b为：取粗多糖，溶于pH值为4～5的浓度为0.005～0.015mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液中，以3500～4500r/min的速度离心，离心液过滤，滤液上离子交换柱，用pH值为4～5的浓度为0.005～0.015mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱2个柱体积，该洗脱液弃去，然后再用pH值为4～5的含NaCl浓度≥0.2mol/L的浓度为0.005～0.015mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱2个柱体积，洗脱液经截留分子量＜1000MW透析袋透析除盐后浓缩，在40℃低温干燥，即得。
4.按照权利要求1-3任一项所述针层孔菌多糖II的提取分离方法，其特征在于：它包括如下步骤：
a、粗多糖的提取：取针层孔菌子实体，粉碎，过直径为260μm孔径筛，分别加10倍量、5倍量和2倍量水煮沸提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩，加入重量为其4倍量90％乙醇，置于4℃冰箱内，静置过夜，以4000r/min 的速度离心分离，沉淀在40℃低温干燥即得粗多糖；
b、针层孔菌多糖的分离：取粗多糖，溶于pH值为4.5的浓度为0.01mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液中，使粗多糖浓度为10mg/ml，以4000r/min的速度离心，离心液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液上离子交换柱，用pH值为4.5的浓度为0.01mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱2个柱体积，洗脱液弃去，然后再用pH值为4.5的含0.2mol/l NaCl的浓度为0.01mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱2个柱体积，洗脱液经100MW透析袋透析除盐后浓缩，在40℃低温干燥，即得。
5.按照权利要求1-3任一项所述针层孔菌多糖II的提取分离方法，其特征在于：所述多糖II经凝胶渗透色谱法测定，其分子量为8439±427Da。
6.一种具有抗肿瘤活性的针层孔菌多糖II，其特征是，该针层孔菌多糖II是按权利要求1-4任一项所述提取分离方法制备得到的，其分子量为8439±427Da。
7.权利要求6所述的具有抗肿瘤活性的针层孔菌多糖II在制备治疗肿瘤药物或制剂中的应用。
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