[发明专利]用于沙门菌、副溶血弧菌和大肠杆菌O157:H7多重荧光PCR同步检测的引物和探针序列

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种用于沙门氏菌、副溶血性弧菌和大肠杆菌O₁₅₇:H₇三种致病菌核苷酸片段多重荧光PCR同步检测的引物和探针序列。 

【背景技术】

沙门氏菌、副溶血性弧菌和大肠杆菌O₁₅₇:H₇是重要的食源性致病菌，主要通过污染的动物源性食品如水产品等感染人类、导致食物中毒、肠伤寒、尿毒症等，严重时可导致死亡。因此，这三种致病菌备受关注，是我国乃至世界多数发达国家对进出境水产品等动物源性产品必须检验或监控的致病菌。 

水产品是我国出口欧美的主要农产品，多年来为我国的出口创汇作出了很大贡献。随着世界各国对食品安全的高度重视，各国对进口食品包括水产品的检测要求越来越高，往往需同时检测沙门氏菌、副溶血性弧菌等多种致病菌。然而，目前尚未有能同时检测水产品中多种致病菌的方法与相关标准。虽然关于这三种致病菌的检验有各种快速检测方法，如免疫磁株富集法、酶联免疫吸附法、自动酶联免疫荧光法、显色培养基法、DNA探针技术、PCR技术等，但由于这些方法存在这样或那样的缺点而未得到广泛推广，事实上，我国相关部门对水产品致病菌的检验基本还停留在传统的细菌分离培养上，不但费时，往往需要4～7天时间，还可能因操作繁杂，所用试剂多而导致漏检。2005年1～7月我国输美水产品就有11批次因被美国FDA检出沙门氏菌而被扣留，给企业造成了较大经济损失。因此，在水产品检验中迫切需要一种可同时检测多种致病菌的快速、简便、准确、高效、经济的检验方法。实时荧光PCR(Real TimePCR，)技术是近年发展起来的新技术，它不仅具有快速、简便、灵敏等优点， 而且由于该法采用引物和探针的“双保险”，因此特异性更强。由于实时荧光PCR不但可以检测单一的病原菌，而且能实现多种病原菌的同步检测，因此更经济更省力也更快速。故实时荧光PCR已成为检测领域越来越重要的一种检测手段。 

【发明内容】

本发明的目的是提供一种用于同步检测沙门氏菌、副溶血性弧菌和大肠杆菌O₁₅₇:H₇三种致病菌核苷酸片段的引物探针序列。引物序列包括： 

探针序列包括： 

  菌名   目标基因   引物名称  序列   沙门氏菌   invA   探针  TGGCATTATCGATCAGTACCAGCCGTC  副溶血  性弧菌   toxR   探针  CGCACAAGGCTCGACGGCTGA   大肠杆菌  O₁₅₇:H₇  RFBE   探针  ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT

基于上述目的，本发明采用以下具体实施方案：