[发明专利]一种含有重组人角质细胞生长因子-2滴眼液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组人角质细胞生长因子-2滴眼液及其制备方法，特别是一种适用于治疗各种原因引起的角膜上皮损伤的重组人角质细胞生长因子-2的滴眼液及其制备方法。

背景技术

人眼角膜共分5层，最外面那层厚约50微米的非角化鳞状上皮叫做角膜上皮。角膜上皮经常暴露于恶劣的环境中，容易受到物理、化学、微生物、寄生虫、免疫等多种因素的损害，常导致角膜上皮愈合延迟或不愈，严重的可造成角膜溃疡、穿孔等严重并发症，临床治疗颇感棘手。此外，眼科手术和创伤后快速而完整的角膜上皮修复对维持正常视力也是必要的。目前，临床上可供选用的促角膜上皮损伤的有效药物并不多见，常用的药物是进口的小牛血清眼膏。国内市场上唯一基因工程药物贝复舒(重组牛bFGF滴眼剂)的问世，开创了国内治疗角膜上皮损伤药物的新纪元，主药是重组牛bFGF，但是对于人的适应性差并且对角膜新生血管有促进作用。正常角膜无血管，这是维持角膜透明的重要因素，同时也是角膜能够处于相对免疫赦免状态的一个必要条件。但是在眼部感染性疾病、化学伤以及长期配戴角膜接触镜的患者，角巩膜缘部的血管会侵入角膜并向中央生长，形成角膜新生血管。角膜新生血管的结构往往比较脆弱，渗透性强，易发生出血和继发纤维化，从而严重影响视力乃至失明。同时，角膜新生血管也破坏了角膜的免疫赦免状态，使角膜移植术后免疫排斥的发生率明显升高。

角质细胞生长因子-2(KGF-2)是成纤维细胞生长因子家族中第10个成员，是机体内自身存在的多肽生长因子，KGF-2为单拷贝基因，由3个外显子和2个内含子组成，定位于15号染色体，是一条单链多肽，含有5个半胱氨酸残基，其中4个半胱氨酸形成2对二硫键，另一个在折叠的肽中，为β2三叶草型。其编码的蛋白由208个氨基酸残基组成，N端有约40个氨基酸残基的信号肽序列，成熟蛋白为169个氨基酸(40～208氨基酸残基)，理论分子质量为19.3×103，相对分子质量约为24×103。KGF-2不同于FGFs家族其他成员的最重要一点是KGF-2由成纤维细胞及其他间质细胞分泌产生，对肝素具有很强的亲和力，特异性作用于上皮细胞表面的酪氨酸激酶受体FGFR2 IIIb(KGFR)和FGFR1 IIIb。KGF-2与FGFR2 IIIb的亲和力很高，而与FGFR1 IIIb的亲和力很低，只有在高浓度KGF-2存在时才与FGFR1 IIIb结合。KGF-2特异的促上皮细胞增殖作用主要通过FGFR2 IIIb介导，而FGFR2 IIIb仅在上皮细胞中表达。KGF-2与受体结合后，促使受体胞内的C端酪氨酸残基磷酸化，磷酸化的受体具有酪氨酸激酶活性，并与一系列的靶蛋白发生作用，引发信号级联反应，其生理作用主要承担间质细胞-上皮细胞之间的信号转导，是体内上皮细胞增殖的重要旁分泌介质，有广泛的生物学功能。目前证实，KGF-2不仅起着维持正常组织的结构和功能，而且参与组织的损伤修复，对烧伤、溃疡、切割伤的修复、再生比其他生长因子具有更显著的促进愈合、减少瘢痕的作用。FGFs家族中各成员之间功能具有一定的交叉，其中KGF-2对上皮组织具有高度特异性，对比目前上市的生长因子类滴眼液具有修复角膜上皮细胞的同时并不促进损伤引起的角膜新生血管的生长。

发明内容

本发明的目的，是公开一种具有角膜修复并不促进角膜新生血管生长的滴眼液，特别是一种适用于治疗各种原因引起的角膜上皮损伤的重组人角质细胞生长因子-2的滴眼液。

本发明的另一个目的是公开上述滴眼液的制备方法。

本发明所研制的重组人角质细胞生长因子-2滴眼液，主要由重组人角质细胞生长因子-2和基质两部分组成。其中重组人角质细胞生长因子-2是利用基因工程方法表达后纯化得到的。基质部分由一定比例的抗氧化剂、螯合剂、稳定剂、渗透压调解剂、表面活性剂组成和合适的缓冲体系组成。其中抗氧化剂的种类以及各自的浓度分别为0.1％～5％甲硫氨酸；0.1％～5％组氨酸；螯合剂为0.01～1％EDTA；稳定剂的种类以及各自的浓度分别为0.5％～10％甘露醇；1％～10％甘油；0.1％～5％L-组氨酸盐酸盐；0.1％～5％PEG-300；表面活性剂的种类以及各自的浓度为0.01％～0.5％泊洛沙姆188；0.001～0.5％吐温80；渗透压调解剂为0.1％～0.7％氯化钠；合适的缓冲体系为5mM～100mM磷酸盐缓冲液，缓冲体系的pH范围是6.0～7.5。