[发明专利]日本血吸虫紫外线（UV）－照射致弱尾蚴的单链抗体库

说明书

技术领域：

本发明涉及基因工程抗体领域，具体涉及日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及鉴定方法。

背景资料：

血吸虫病仍然在许多是一种严重危害人类身体健康和生命安全、阻碍疫区经济发展和社会进步的人兽共患病。Chitsulo等报道，全世界74个国家，6亿人受感染威胁，2亿人被感染，其中1.2亿人出现了症状，2000万人被严重感染。血吸虫病病情的控制至今仍然是世界上急待解决的一个严重的公共卫生问题。

血吸虫疫苗的开发研制是血吸虫病防治研究的重点，照射致弱尾蚴是目前能有效抗日本血吸虫感染的一种免疫原，经紫外线照射致弱的血吸虫尾蚴免疫宿主可诱导宿主产生较强的免疫保护力，有的减虫率高达90％，保护力持续时间长达6个月之久。实验证明，紫外线照射致弱尾蚴多次免疫动物后，其免疫保护机制转为抗体依赖性的体液免疫为主。随后又证实了IgG为其主要的效应抗体，尤其是提取纯化的亚型IgG1抗体可诱导更高的保护力。因此抗体在日本血吸虫紫外线照射尾蚴多次免疫免诱导的免疫保护机制中起着重要作用。但是由于照射致弱疫苗会造成宿主病理损害、其抗原材料来源有限、制备、保存等问题，限制了其在人体中的应用。

噬菌体抗体库技术是20世纪90年代初发展起来的基因工程抗体技术，随着蛋白组学时代的到来，大量新发现基因的表达和功能的研究需要众多高亲和力、高特异性抗体。该技术可很好地解决此问题，并被认为是抗体工程领域的革命性进展。此技术用PCR将免疫球蛋白全套可变区基因扩增出来，克隆到表达载体中，通过与单链丝状噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白表达在噬菌体的表面，使之成为噬菌体抗体。由于此技术绕过细胞杂交，避免了杂交瘤细胞系不稳定的缺点，且操作简便，库容量大，成本低，还可不经免疫制备人源或鼠源性抗体，故被认为是继杂交瘤抗体之后的第3代抗体。单链抗体是具有与抗原特异性结合的最小功能单位，它以体积小、渗透性强等特点，可以很方便地导入细胞内，产生细胞内抗体，结合、封闭特定抗原，造成细胞的表型剔除，用以研究蛋白质功能，探索致病机制。它亦可作为人源性抗体，且其分子小、免疫原性低、用于人体不易产生抗异种蛋白反应，易于进行基因操作等特点，因而可开发出更加理想的分子疫苗。

本发明利用紫外照射致弱尾蚴的体液免疫高保护力的特点和噬菌体抗体库诸多的优点，成功构建了紫外照射日本血吸虫致弱尾蚴单链抗体库单链抗体(ScFv)表达文库。