[发明专利]一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片

权利要求书

1、一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片，其特征在于：所述的乳癌预警芯片4是由一端包被真核表达制备的一抗hTK1单克隆抗体(代号为2A₆-McAb)和另一端则包被兔抗鼠IgG多克隆抗体的条状纤维层析固相载体NC膜、滤样纸、吸水玻璃纤维纸、及标记有胶体金和二抗hTK1单克隆抗体(代号为3E₈-McAb)结合物的聚酯膜片等依此粘贴于白色PVC塑料片所组成。

2、根据权利要求1所述的一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

一、制备含有一抗hTK1单克隆抗体2A₆-McAb和兔抗鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维微孔滤膜片：

1)将一抗hTK1单克隆抗体2A₆-McAb和兔抗鼠IgG多克隆抗体分别用10-20mmol/L，pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成0.8-1.6g/L；

2)用抗体包被机将它们分别包被于硝酸纤维微孔滤膜上；

3)将包被有一抗hTK1单克隆抗体2A₆-McAb和兔抗鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维微孔滤膜上置于10-20mmol/L，pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(1-2％BSA)中，于37℃恒温浸泡60min；

4)再用10-20mmol/L，pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤，最后置于室温或真空干燥后备用。

二、进行hTK1基因蛋白乳癌预警芯片的组装：

以膜片正中点的加样孔3为起点标志，左边和右边分别用热龙胶依次将滤样纸、吸水玻璃纤维纸、聚酯膜片(胶体金-二抗hTK1单克隆抗体3E₈-McAb结合物)、包被有一抗hTK1单克隆抗体2A₆-McAb和兔抗鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维微孔滤膜和吸水滤纸粘贴于白色的PVC塑料片上，并在此膜片上覆盖一层有效的保护膜；完成贴膜后即可进行真空干燥；最后，将全部贴好的条板在专用切割机上切成一定规格的条状膜片，装入塑料盒中，加入干燥剂密封保存，即成乳癌基因蛋白预警芯片4。

3、根据权利要求1所述的一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片，其特征在于：该纳米级的胶体金源于氯金酸(HAuCl₄)还原剂柠檬酸三钠(枸橼酸三钠)的作用，其静电作用使其聚合成为一种稳定的胶体状态、且是特定大小、均匀一致的纳米金颗粒；而且，由于其在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子正电荷基团通过静电牢固结合，并不会影响基因蛋白抗原和单克隆抗体蛋白质的生物特性。

4、根据权利要求1所述的一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片，其特征在于：该乳癌预警芯片4中条状纤维层析固相载体NC膜上所包被的一抗hTK1单克隆抗体(代号为2A₆-McAb)来源于真核所表达制备的人类I型胸苷激酶(hTK1)；且聚酯膜片上标记的胶体金和二抗hTK1单克隆抗体(代号为3E₈-McAb)结合物中的二抗hTK1单克隆抗体(代号为3E₈-McAb)同样来源于真核所表达制备的人类I型胸苷激酶(hTK1)，但其来源于不同于一抗hTK1单克隆抗体(代号为2A₆-McAb)的另一阳性克隆株。

5、根据权利要求4所述的一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片，其特征在于：这两种hTK1单克隆抗体虽然同属于人类I型胸苷激酶(hTK1)单克隆抗体，对于其相对应的抗原均具有同样的专一性及特异性免疫反应，但两者却具有不同的结合位点、亲和力及亲和常数。

6、根据权利要求5所述的一种简便快速测定人类I型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片，其特征在于：这两种hTK1单克隆抗体均能与人类I型胸苷激酶(hTK1)基因蛋白抗原发生专一性及特异性免疫反应，即可形成一抗hTK1单克隆抗体(代号为2A₆-McAb)2和二抗hTK1单克隆抗体(代号为3E₈-McAb)同时与与人类I型胸苷激酶(hTK1)基因蛋白抗原结合的双抗夹心免疫复合物结构(Ab1-Ag-Ab2)或者说2A₆-McAb--hTK1 Ag--3E₈-McAb双抗夹心免疫复合物结构。