[发明专利]用于猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测的探针、引物及试剂盒有效
申请号: | 200810031827.3 | 申请日: | 2008-07-18 |
公开(公告)号: | CN101348837A | 公开(公告)日: | 2009-01-21 |
发明(设计)人: | 黄萍;朱中武;龙新平;黄志强;唐连飞;鲁杏华;黄辉;胡宇东 | 申请(专利权)人: | 黄萍 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 | 代理人: | 卢宏 |
地址: | 410004湖南省*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 猪瘟 病毒 实时 荧光 定量 rt pcr 检测 探针 引物 试剂盒 | ||
1.一种用于猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测的试剂盒,包括探针和引物对,其中探针的序列为5’-tgatgggggtacgacctgatagggt-3’,探针的5’端和3’端分别采用荧光基团FAM和TAMRA进行修饰;
引物对序列为5’ -gacacaagcgcaggcaatag-3’和5’ -agtgggttccaggartacat-3’。
2.一种用于猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测的试剂盒,其特征在于该试剂盒是由下列试剂所组成:
1)阳性标准品:采用人工合成的含有目的检测基因的RNA作为标准样品,共4瓶,300μl/瓶,-20℃冷冻保存,标准品1:107拷贝/5μl,标准品2:105拷贝/5μl,标准品3:103拷贝/5μl,标准品4:101拷贝/5μl;
2)阴性对照:采用无猪瘟病毒感染猪组织,按1∶5倍体积加入0.1%DEPC水,于组织匀浆器中充分研磨,然后3500rpm离心20min,取上清液提取RNA,溶解于DEPC水,分装成300μl/瓶,-20℃冷冻保存备用;
3)0.1%DEPC水:在去离子水中加入0.1%焦碳酸二乙酯,室温下过夜处理,15磅30分钟,2×10ml/瓶;
4)Trizol裂解液:50ml/瓶,棕色瓶分装,4℃保存备用;
5)RT-PCR反应液:每个反应包括5×PCR buffer 5.0μl、10mmol dNTPs 0.5μl、25mmol MgCl2 2.0μl以及权利要求1所述的引物各0.5μl,共8.5μl,50个反应体系共计425μl;
6)反应酶:每个反应体系包括Reverse Transcriptase 0.2μl、Taq DNA聚合酶0.5μl,含量为3U/μl,共0.7μl,50个反应体系共计35μl,-20℃冷冻保存备用;
7)含有权利要求1所述的探针序列的溶液:探针序列用0.1%DEPC水稀释,浓度为10μmol/L,每个反应体系0.5μl,50个反应体系共计25μl,-20℃冷冻保存备用。
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