[发明专利]用毕赤酵母表达系统制备抗人乳头瘤病毒16型感染的疫苗的方法有效
| 申请号： | 200810032654.7 | 申请日： | 2008-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN101487009A | 公开（公告）日： | 2009-07-22 |
| 发明（设计）人： | 张高峡;沈琼;袁靖宇;张千里;魏健;熊莹华;雷建强;吴克 | 申请（专利权）人： | 上海泽润生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/37 | 分类号： | C12N15/37;C12N15/81;C07K14/025;A61K39/12;A61P35/00;A61P31/20 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 | 代理人： | 薛 琦 |
| 地址： | 201203上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用毕赤 酵母 表达 系统 制备 乳头 病毒 16 感染 疫苗 方法 | ||
1.一种利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统制备重组人乳头瘤病毒16型L1蛋白的方法，其包括将优化设计的HPV 16L1基因克隆至表达载体，转化毕赤酵母菌株，培养转化体，获得重组的HPV 16L1蛋白；其中，所述的优化设计的HPV 16L1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的表达载体选自质粒pPICZ、pPIC6、pGAPZ和pAO815。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的转化用电转化或原生质体转化。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的毕赤酵母菌株选自毕赤酵母X-33、GS115、KM71和SMD1168菌株。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，将所述的优化设计的HPV 16L1基因克隆至质粒pPICZ，得到重组表达质粒，然后电转化毕赤酵母X-33株，筛选得到基因工程菌，经发酵培养、破菌、离心、柱层析纯化得到重组的HPV 16L1蛋白。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的柱层析纯化包括采用POROS 50HS柱层析初纯，再经过CHT柱层析精纯。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的重组的HPV 16L1蛋白能在毕赤酵母体内自组装成病毒样颗粒。
8.一种制备抗人乳头瘤病毒16型感染的疫苗的方法，其特征是，包括采用权利要求1～7任一项所述的方法制备重组人乳头瘤病毒16型L1蛋白，所述蛋白能在毕赤酵母体内自组装成病毒样颗粒，然后加入药学上可用的疫苗佐剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征是，所述的药学上可用的疫苗佐剂为铝佐剂。
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