[发明专利]HNF4α诱导分化治疗人体恶性实体瘤

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学、细胞生物学以及医学领域。具体地，本发明涉及利用肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor-4α，HNF4α)诱导人体恶性实体瘤细胞发生分化，从而应用于实体肿瘤治疗的方法和用途。

背景技术

肿瘤诱导分化治疗(differentiation therapy)是近20年来肿瘤临床治疗方面的重要突破。诱导分化治疗是通过诱导分化方法促进肿瘤细胞向成熟阶段分化，恢复正常的细胞表型和功能并抑制恶性肿瘤细胞的增殖。诱导分化治疗打破了肿瘤发展不可逆的传统认识，有力的推动了整个癌症研究领域的发展。

我国学者曾率先运用全反式维甲酸诱导分化治疗急性早幼粒细胞性白血病，取得了较好的疗效。然而，尽管白血病的分化治疗取得了很大进展，但恶性实体瘤的分化治疗仍然是肿瘤治疗研究领域的难题。迄今为止，对于诸如肝癌、胃癌、肠癌、肾癌以及胰腺癌等人体恶性实体肿瘤的诱导分化治疗仍未见明确报道。迄今实验表明，全反式维甲酸对恶性实体瘤的分化无明显作用。

选择合适的药物或相关物质进行特异性靶向调控是肿瘤诱导分化治疗的难点。有研究利用药物或蛋白体外调控实体肿瘤的分化状态，但效果有限。体内实验大多提示：上述方法在诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤组织坏死方面有一定的作用，但是很难实现显著调控或逆转实体瘤低分化程度。

在众多候选物质中筛选出有效的诱导肿瘤分化的试剂是非常困难的，也是收效甚微的。因此，选择出与肿瘤细胞诱导分化密切相关的关键蛋白、分子和基因进行特异性靶向调控是肿瘤诱导分化治疗的核心问题之一。

近年来，随着人类基因组计划研究的不断深入，为人们利用基因技术手段调控甚至改变细胞重要基因的表达以改变其表型、分化状态和生物学功能创造了条件。然而，虽然已经证实有一些物质或基因在体外实验中可改善肿瘤细胞的某些生物性特性(如增殖及克隆形成能力降低、部分正常细胞功能基因表达上调)，一些物质甚至证实了可降低癌细胞在动物体内的成瘤作用，但是往往发现这些物质对正常细胞也有影响(副作用)，并不能特异性地在体内诱导实体肿瘤发生分化。本发明人曾研究了全反式维甲酸、生长抑素、肿瘤坏死因子以及三氧化二砷等物质体外对肝癌细胞株分化的调控作用，均未筛选出有明确分化治疗作用的药物或蛋白，同时体内研究也发现这些物质不能有效地诱导实体肿瘤发生分化。

因此，本领域迫切需要开发与恶性实体瘤细胞诱导分化密切相关的特定蛋白或基因，能够作为特异性调控的靶标，从而有效地诱导分化实体瘤。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与恶性实体瘤细胞诱导分化密切相关的特定的基因-HNF4α基因及其编码产物HNF4α蛋白，以及HNF4α基因/蛋白在诱导分化实体瘤中的用途。

本发明的另一个目的在于提供一种通过HNF4α基因/蛋白分化诱导恶性实体瘤从而治疗肿瘤的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种肝细胞核因子4α(Hepatocyte NuclearFactor-4α，HNF4α)基因和/或蛋白的用途，它们被用于制备诱导恶性实体瘤细胞分化的诱导分化试剂或组合物。

在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物含有(a)HNF4α蛋白、HNF4α编码序列或含所述编码序列的表达载体以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述的表达载体包括病毒载体和非病毒载体。较佳地，所述的非病毒载体为脂质体。

在另一优选例中，所述的实体瘤选自：肝癌、胃癌、肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌或生殖腺肿瘤。

在另一优选例中，所述的药物组合物还用于体内抑制实体瘤的形成。

在另一优选例中，所述的肝细胞核因子4α是人的肝细胞核因子4α。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为注射剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物还含有化疗剂。

在本发明的第二方面，提供了一种诱导或促进哺乳动物中实体瘤分化的方法，它包括步骤：给需要治疗的哺乳动物对象施用肝细胞核因子4α蛋白、其编码序列或含所述编码序列的表达载体。

在另一优选例中，所述的哺乳动物是人。

附图说明

图1.RT-PCR检测人肝肿瘤细胞株HNF4α基因和肝细胞相关功能基因的表达。

图2.RT-PCR获得HNF4α cDNA片段。

图3.体外连接获得穿梭质粒pAdTrack-CMV-HNF4α Bgl II和EcoRV酶切鉴定。