[发明专利]一种微量DNA检测的方法无效
申请号: | 200810034461.5 | 申请日: | 2008-03-11 |
公开(公告)号: | CN101250586A | 公开(公告)日: | 2008-08-27 |
发明(设计)人: | 于明辉;王剑晖;范忠鹏;李凯;陆炯;肖君华 | 申请(专利权)人: | 东华大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人: | 黄志达;谢文凯 |
地址: | 201620上海市松*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 微量 dna 检测 方法 | ||
1.一种微量DNA检测的方法,步骤包括:
(1)待检样本DNA的抽提;
(2)以步骤(1)中的DNA为模板,进行第一次PCR反应;
(3)反应结束后,取出一部分步骤(2)中PCR反应液留待后面的巢式PCR反应;
(4)将步骤(2)中产物的剩余部分利用乙醇沉淀、纯化回收原始用于检测的DNA模板;
(5)以步骤(4)回收得到的原始DNA作为初始模板,进行第二次PCR反应;
(6)根据需要重复(3)、(4)、(5);
(7)第一、二次PCR反应产物进行巢式PCR,再分析结果。
2.根据权利要求1所述的微量DNA检测的方法,其特征在于:所述样本DNA的抽提是采 用常规酚-氯仿抽提法或用试剂盒抽提。
3.根据权利要求1所述的微量DNA检测的方法,其特征在于:所述第一次PCR反应和第二 次PCR反应为单重或多重PCR,其第一次PCR反应与第二次PCR反应的区别在于扩增的目 的片段不同,第二次PCR反应对第一次PCR反应没有扩增的基因进行扩增。
4.根据权利要求1所述的微量DNA检测的方法,其特征在于:所述步骤(4)中乙醇沉淀、 纯化回收是通过加入无水乙醇-20℃沉淀,12000转/分离心5分钟,去上清,再用100μl 75% 的无水乙醇洗涤沉淀下来的模板DNA。
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