[发明专利]高通量筛选G蛋白偶联受体配体的方法和模型

权利要求书

1.一种基因工程化的真核细胞，其特征在于，所述的细胞：

(1)含有至少一种表达载体，所述的表达载体含有外源的G蛋白α 15/16亚基的编码基因，以及外源的G蛋白偶联受体的编码基因；或

(2)基因组中整合有外源的G蛋白α 15/16亚基的编码基因，以及外源的G蛋白偶联受体的编码基因。

2.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述的G蛋白偶联受体选自：α 2b肾上腺素受体，β2肾上腺素受体，多巴胺D5受体，δ阿片受体，大麻受体1，大麻受体2，趋化因子受体CCR5或趋化因子受体CXCR4。

3.权利要求1或2所述的细胞的用途，其特征在于，用于筛选G蛋白偶联受体的配体。

4.一种筛选G蛋白偶联受体的配体的方法，其特征在于，所述的方法包括：用候选物质处理权利要求1或2所述的细胞，检测所述细胞中钙离子流的变化，从而确定候选物质是否属于G蛋白偶联受体的配体，和/或候选物质的性质。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(i)用候选物质处理权利要求1或2所述的细胞；

(ii)检测所述(i)的细胞中钙离子流的变化；

其中，若细胞中钙离子流增强，则表明该候选物质是G蛋白偶联受体的激动剂。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(S1)在测试组中，用候选物质处理权利要求1或2所述的细胞；

(S2)检测(S1)的细胞中钙离子流的变化，并与对照组比较；所述的对照组是不用候选物质处理的权利要求1或2所述的细胞；

其中，若测试组的细胞中钙离子流在统计学上高于对照组，则表明该候选物质是G蛋白偶联受体的激动剂。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(a)在测试组中，分别用候选物质和G蛋白偶联受体的激动剂处理权利要求1或2所述的细胞；

(b)检测测试组的细胞中钙离子流，并与对照组比较；所述的对照组是不用候选物质处理且用G蛋白偶联受体的激动剂处理的权利要求1或2所述的细胞；

其中，若测试组的细胞中钙离子流在统计学上低于对照组，则表明该候选物质是G蛋白偶联受体的配体。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：

(c)在测试组中，用(b)获得的G蛋白偶联受体的配体处理权利要求1或2所述的细胞；

(d)检测(c)的细胞中钙离子流的变化，并与对照组比较；所述的对照组是不用(b)获得的G蛋白偶联受体的配体处理的权利要求1或2所述的细胞；

其中，若测试组的细胞中钙离子流在统计学上高于对照组，则表明该候选物质是G蛋白偶联受体的激动剂；若测试组的细胞中钙离子流低于或接近于对照组，则表明该候选物质是G蛋白偶联受体的拮抗剂。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的候选物质溶解在二甲基亚砜中，所述的二甲基亚砜在筛选体系中的浓度按照体积比是0.1-2％。

10.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述细胞被置于标准96孔细胞培养板中，每孔细胞个数为30000±5000个。