[发明专利]提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体及其制法和用途

权利要求书

1.一种提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，包括大豆球蛋白基因启动子、大豆球蛋白基因片段、信号肽编码序列、终止子及内切酶敏感序列，其特征在于：所述大豆球蛋白基因启动子为第一类群大豆11S球蛋白基因启动子，所述大豆球蛋白基因片段为大豆11S球蛋白Gy7基因片段。

2.根据权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述第一类群大豆11S球蛋白基因启动子为Gy1、Gy2或Gy3基因启动子。

3.根据权利要求2所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述第一类群大豆11S球蛋白基因启动子为Gy1基因启动子。

4.根据权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述大豆11S球蛋白Gy7基因片段为Gy7全基因序列或Gy7基因的cDNA编码序列片段。

5.根据权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述信号肽编码序列在第一类群大豆11S球蛋白基因启动子的下游。

6.根据权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述信号肽编码序列在大豆11S球蛋白Gy7基因片段的上游。

7.根据权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体，其特征在于：所述终止子为CaMV 35S基因终止子。

8.一种权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)采用PCR方法扩增第一类群大豆11S球蛋白基因启动子，然后将扩增产物与T载体连接得中间载体T-1；

2)采用PCR方法扩增下游带有信号肽编码序列的第一类群大豆11S球蛋白基因启动子，然后将扩增产物与T载体连接得中间载体T-2；

3)采用PCR方法扩增大豆11S球蛋白Gy7全基因中信号肽后的序列或采用反转录及PCR方法扩增大豆11S球蛋白Gy7基因的cDNA编码序列中信号肽后片段，然后将扩增产物与T载体连接获得中间载体T-3；

4)采用PCR方法扩增上游带有信号肽编码序列的大豆11S球蛋白Gy7全基因序列或采用反转录及PCR方法扩增上游带有信号肽编码序列的大豆11S球蛋白Gy7基因的cDNA编码序列，然后将扩增产物与T载体连接获得中间载体T-4；

5)将中间载体T-1和中间载体T-4或中间载体T-2和中间载体T-3进行酶切、并与基因终止子、植物通用载体其他序列连接，即得本发明的表达载体。

9.一种权利要求1所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体的用途，其特征在于，所述表达载体用于转化大豆，以获得高含量优质大豆11S球蛋白新品种。

10.根据权利要求9所述的提高大豆蛋白质含量和质量的表达载体的用途，其特征在于，所述表达载体用于转化大豆，以获得无抗性选择标记基因、无报告基因的高含量优质大豆11S球蛋白新品种。