[发明专利]发酵多杀菌素产生菌的培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物农药生产技术领域，具体涉及一种发酵多杀菌素产生 菌的培养基。

背景技术

多杀菌素(Spinosad)是1982年美国礼莱公司科研人员从维尔京群岛土 壤中分离的刺糖多胞菌(Saccharopolyspora spinosa)发酵液中提取得到的一 种新颖的大环内酯类超高效生物源杀虫剂。由美国陶氏农业科学公司生产， 于1999年在我国注册商品名为催杀(Tracer 48％悬浮液)和菜喜(Succes s 2.5％悬浮液)，分别应用于小菜蛾和棉铃虫等的防治。其有效成份为Sp inosyn A和D，其中A和D比例分别为85％和15％。多杀菌素主要应用于 对棉铃虫、烟青虫、小菜蛾、果蝇、甜菜夜蛾、蓟马等的防治，适用于棉 花、茶、蔬菜和苹果、梨、桃等落叶果树。到1999年多杀菌素已经在24 个国家、100多种作物上进行了注册登记。

由于多杀菌素的毒性低，阳光下易分解，使用悬浮液不同pH对其活力 不受影响，经美国环保局(Enviromental Protection Agency)测定该药剂不 滞留于环境中，为低毒、高效的生物杀虫剂。

多杀菌素因其具有降解完全，对害虫高效，对哺乳动物、鸟类、鱼类 甚至大多数益虫具有宽广的安全界限等优点而获得美国“总统绿色化学品 挑战奖”。多杀菌素的一个重要特点是其选择毒性比远高于其他常用农药， 比阿维菌素大300-400倍。

美国专利US5362634公开了一种多杀菌素产生菌发酵用培养基，其中供 试菌株为Saccharopolyspora spinosa NRRL 18395，所述发酵培养基的配方 及含量为：葡萄糖4％、植物蛋白(部分酶水解)1.5-3％、棉籽粉1.0％、CaCO₃0.3％、大豆油1.0％、加自来水至1升。该培养基的发酵单位为59.3mg/L。 鉴于此发酵配方的发酵单位偏低，因此不利于产业化。

国内对多杀菌素的研究尚处于试验阶段。与其它农抗产生菌一样，环 境条件是影响多杀菌素产生菌的产素水平的一个重要因素，因此研究一种 高效、价格低廉的发酵培养基是解决多杀菌素产业化问题的一个技术关键。 在现有的技术中，多杀菌素的发酵培养基效果不佳，发酵单位偏低，不能 满足产业化的需要，并且存在原料成本较高和来源有限等问题，并在发酵 过程中无法有效控制消除泡沫，发酵液中常含有没有被利用完全的多糖从 而导致发酵液粘稠不利用后续提取步骤的进行。因此解决以上问题成为多 杀菌素产业化过程中必须面对的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是通过培养基优化实验，提供一种有利于 产生多杀菌素(发酵单位提高)的发酵培养基。利用本发明的发酵培养基， 可使多杀菌素产生菌在原有发酵水平基础上最高提高19倍，有利于国内多 杀菌素的产业化。

本发明中，％比为重量百分比；

术语“速效碳源”指葡萄糖、果糖、甘露醇。

术语“迟效碳源”指蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、糊精、可溶性淀粉。

本发明提供一种以Saccharopolyspora spinosa NRRL 18395为菌种，发酵 多杀菌素产生菌的培养基，其组分及含量为：碳源5.0～9.0％、氮源3.0～ 6.0％、植物油0.2～2.5％、氨基酸0.1～0.5％、CaCO₃ 0.1～1.0％和水81.0～ 91.6％。

其中，所述的碳源可以选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、甘露醇、 乳糖、淀粉、糊精、可溶性淀粉或其组合；优选为葡萄糖，其含量优选为 8.0％。

所述的氮源可以选自全脂奶粉、鱼粉蛋白胨、花生粕粉、玉米浆、棉 籽粉、花生饼粉或其组合；优选为棉籽粉和鱼粉蛋白胨，且所述棉籽粉∶鱼 粉蛋白胨的重量比为2～4∶0～2，优选为3∶2。

所述的植物油可以选自大豆油、棉籽游、玉米油、葵花油或其组合； 优选为葵花油，其含量优选为2.0％。

所述氨基酸可以选自谷氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、亮氨酸或其 组合；优选为赖氨酸，其含量优选为0.1％。

所述水可以选自自来水或蒸馏水，优选为自来水。

本发明最优选的培养基的组分及含量为：葡萄糖8.0％、棉籽粉3.0％、 鱼粉蛋白胨2.0％、葵花油2.0％、赖氨酸0.1％、CaCO₃ 0.5％、和自来水100ml。