[发明专利]毛细管电泳－化学发光法分离检测氨基酸的装置与方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种氨基酸的分离检测装置和方法，特别是一种采用毛细管电泳分离-过氧草酸酯化学发光法分离检测氨基酸的装置和方法。

背景技术

毛细管电泳(CE)分离技术具有简单、高效、快速、非常少的样品使用量等优点，自从1980年首次被发明后，已发展成为一种经典的分离分析技术，目前已在化学、生物、医学及环境等领域获得广泛应用。但由于CE溶质区带的超小体积，需要高灵敏度的检测方法与之匹配，以及电泳过程中产生焦耳热和气泡等问题，因此，高灵敏检测方法及其相应电泳-检测系统的研制是CE技术发展的关键问题。目前已采用的检测方法有紫外-可见吸收光谱、激光诱导荧光、电化学、电化学发光、放射性同位素、化学发光(CL)、质谱等。CL应用于毛细管电泳检测是一种非常理想的技术，相对于其它光度方法如荧光法等，CL不需要激发光，避免了瑞利散射和拉曼散射等噪音，因而具有比荧光法等方法更高的信噪比与检测灵敏度。同时，由于CL不需要激发光源，因而检测装置更简单、更便宜。CL目前已成功应用于CE-CL系统分析蛋白质、NDA、多肽、金属离子、氨基酸和其它物质等，已采用的CL系统包括鲁米诺、吖啶酯、三联吡啶钌、过氧草酸酯等。过氧草酸酯发光系统是基于过氧草酸酯被H₂O₂氧化生成一高能态的1，2-二氧杂环丁烷二酮中间体，后者将能量传递给反应体系的另一种物质(通常为荧光物质)，使这种荧光物质受激发而发荧光。过氧草酸酯发光体系具有高的发光强度，无需催化剂和增强剂等优点，因而应用于CE-CL系统，是一种理想的发光体系。但是，由于过氧草酸酯难溶于水及遇水水解而降低发光，因此只能溶于有机溶剂，但有机溶剂影响分析物的电泳行为，特别是，有机溶剂在电泳过程中由于受来自强大电流产生的焦耳热的影响，易受热挥发而产生气泡，此外，H₂O₂分解及化学发光反应过程中也产生气泡，这些气泡的产生容易导致电泳过程中的电流中断，从而严重影响分离与测定。因此，设计CE-CL装置，特别是CE-CL的电极模式及混合、反应界面等，以减少气泡的产生、避免电流中断，对过氧草酸酯CE-CL系统至关重要。在已有文献报导的方法中，通常采用一四通(或三通)固定分离毛细管与反应毛细管，电泳毛细管的末端插入反应毛细管中，接地电极插入四通的一个接口处或者是反应毛细管的末端。实验发现，采用这种装置，电流不稳定，电泳容易中断。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术中存在的问题，提供一种毛细管电泳-化学荧光法分离检测氨基酸的装置。

本发明的目的之二在于提供该装置分离检测氨基酸的方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种毛细管电泳-化学荧光法分离检测氨基酸的装置，包括高压电源、电泳毛细管、金属注射针头、反应管、引入毛细管和微泵注射器，其特征在于反应管为一斜置的无色透明的玻璃管，上端开口，下端密封；两根引入毛细管的一端分别连接两个微泵注射器，而另一端由反应管的密封端插入反应管中；电泳毛细管的一端插入电泳缓冲液中，而电泳毛细管的另一端插入一不锈钢金属注射针头中，并使电泳毛细管的末端置于金属注射针头的尖觜的末端；金属注射针头的尖觜端由反应管的开口端插入反应管，金属注射针头的尖觜的末端与两根引入毛细管末端间的距离为2±0.5mm；高压电源的负极通过铂丝连接金属注射针头的另一端；铂丝的一端连接高压电源的正极，而另一端插入电泳缓冲液中；光电倍增管PMT放置于反应管的正上方，接收反应管内的化学发光信号并将信号输入信号接收装置；从反应管中流出的废弃液进入废液瓶中。

上述的反应管的开口端比密封端高1±0.5cm。

一种分离检测氨基酸的方法，该方法采用上述的毛细管电泳-化学荧光法分离检测氨基酸的装置，其特征在于该方法的工艺步骤如下：

a.经清洗后的电泳毛细管中首先充满电泳缓冲液，然后进样；将进样端插入电泳缓冲液，另一端插入反应管内的金属注射针头中，并使电泳毛细管的末端置于金属注射针头的尖觜的末端，其出口刚好露置于PMT下面；

b.两种化学发光试剂，一种为5mmol/L TCPO乙酸乙酯溶液，另一种为0.5mol/LH₂O₂丙酮溶液，分别由两支微泵注射器以10μl/min的流速注入试剂引入毛细管，并使两种化学发光试剂充满反应管；

c.开启高压电源(1)，光电倍增管PMT(11)接收反应管(9)内的化学发光信号并将信号输入信号接收装置(10)，即完成样品中的氨基酸的分离检测。